教学PPT肠科杆菌.ppt

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1、n埃希菌属埃希菌属n沙门氏菌属沙门氏菌属n耶尔森菌属耶尔森菌属n根据生化、血清学试验、根据生化、血清学试验、DNA同源性至少同源性至少包括包括29个菌属，个菌属，120个以上的菌种个以上的菌种。肠杆菌科肠杆菌科 (Enterobacteriaceae)n 是人和动物肠道内正常菌群。一般不致病。是人和动物肠道内正常菌群。一般不致病。常被用作环境和食品卫生的检测指标。常被用作环境和食品卫生的检测指标。n 在人和动物出生后数小时即进入肠道，并在人和动物出生后数小时即进入肠道，并伴终身。伴终身。当宿主免疫力下降或菌侵入肠外组织当宿主免疫力下降或菌侵入肠外组织器官，可引起肠外感染。器官，可引起肠外感染。

2、n 一些特定血清型的菌株与人和动物的疾病密一些特定血清型的菌株与人和动物的疾病密切相关。切相关。n 其中，大肠埃希菌其中，大肠埃希菌(E.coli)最重要。最重要。第一节第一节 埃希菌属埃希菌属(Escherichia)n1,大小为大小为0.4-0.71-3m。大多数菌株有周身鞭。大多数菌株有周身鞭毛。有普通菌毛和性菌毛；毛。有普通菌毛和性菌毛；n对碱性染料着色良好，菌体两端略深。对碱性染料着色良好，菌体两端略深。一、生物学性状一、生物学性状n兼性厌氧兼性厌氧n普通培养基上生长良好，最适普通培养基上生长良好，最适37。n在营养琼脂上形成在营养琼脂上形成圆形突起、光滑、湿润、圆形突起、光滑、湿润

3、、半透明、灰白色菌落，半透明、灰白色菌落，直径直径23mm。n麦康凯琼脂上形成红色菌落、伊红美蓝上麦康凯琼脂上形成红色菌落、伊红美蓝上产生黑色带金属闪光的菌落、产生黑色带金属闪光的菌落、SS琼脂上一琼脂上一般不生长。般不生长。2,菌菌 落落营养琼脂：营养琼脂：圆形突起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落圆形突起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落麦康凯培养基麦康凯培养基麦康凯培养基麦康凯培养基少数致病菌株在血平板上呈少数致病菌株在血平板上呈溶血溶血n能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸产气。能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸产气。n大部分菌株迅速发酵乳糖；大部分菌株迅速发酵乳糖；n吲哚、甲基红试验阳性吲哚、甲基红试

4、验阳性.nIMViC试验为试验为“+、+、-、-”。即为典型。即为典型大肠杆菌。大肠杆菌。3,生化特性生化特性MR+/VP-2 2志贺氏菌志贺氏菌3 3沙门氏菌沙门氏菌4 4大肠杆菌大肠杆菌 n抗原主要有抗原主要有O、K、H三种。是血清型鉴定三种。是血清型鉴定的基础。的基础。nO抗原抗原170种、种、H 抗原抗原56种、种、K抗原在抗原在100种以上。种以上。n根据耐热性不同根据耐热性不同K抗原又分为抗原又分为L、A、B三型。三型。一个菌株只含有一个型别的一个菌株只含有一个型别的K抗原。抗原。n大肠杆菌的血清型表示方法可用大肠杆菌的血清型表示方法可用O:K:H排排列，如列，如O111：K58(

5、B4)：H2 4，抗原结构，抗原结构鞭毛抗原（H）K或Vi抗原菌体抗原（O）O O 抗原抗原（菌体抗原）（菌体抗原）存在于所有革兰氏阴性菌存在于所有革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖层。细胞壁脂多糖层。耐热，耐热，100100不被破坏。不同菌种的不被破坏。不同菌种的O O抗原抗原特异性取决于脂多糖分子末端重复结构多特异性取决于脂多糖分子末端重复结构多糖链的糖残基种类和排列。糖链的糖残基种类和排列。具有种属特异性。具有种属特异性。抗原结构抗原结构存在于鞭毛蛋白。不耐热，存在于鞭毛蛋白。不耐热，6030分分钟即被破坏。钟即被破坏。H抗原的特异性取决于多肽链氨基酸抗原的特异性取决于多肽链氨基酸排列顺序和空间结

6、构。排列顺序和空间结构。细菌失去鞭毛后，运动随之消失，同细菌失去鞭毛后，运动随之消失，同时菌体抗原外露，即为时菌体抗原外露，即为H-O变异。变异。H抗原抗原位于位于O抗原外围，能阻抑抗原外围，能阻抑O凝集现象。凝集现象。多糖性质，多糖性质，6030分钟可去除。分钟可去除。如如大肠杆菌大肠杆菌K抗原。抗原。伤寒杆菌的伤寒杆菌的 Vi抗原。抗原。荚膜或包膜抗原荚膜或包膜抗原化学组成为蛋白质，能干扰化学组成为蛋白质，能干扰O凝集现象。凝集现象。煮沸可以破坏菌毛。煮沸可以破坏菌毛。菌毛抗原菌毛抗原存在于肠道杆菌的表面，为氨基糖聚合物存在于肠道杆菌的表面，为氨基糖聚合物.肠道杆菌共同抗原肠道杆菌共同抗原

7、(Enterobacteria Common Antigen,ECA)鞭毛抗原（H）K或Vi抗原菌体抗原（O）根据致病性大肠杆菌的不同毒力特性和根据致病性大肠杆菌的不同毒力特性和致病机理可将其分为致病机理可将其分为5 5个病原性类型个病原性类型.(一一)产肠毒素大肠杆菌产肠毒素大肠杆菌 (Enterotoxigenic E.coli,ETEC)致人和初生幼畜水样腹泻。致病力与粘附性致人和初生幼畜水样腹泻。致病力与粘附性菌毛和产生肠毒素有关。菌毛和产生肠毒素有关。nETEC：n在体内或体外生长时产生的并能分泌到胞外在体内或体外生长时产生的并能分泌到胞外的一种毒素，对动物或人的肠有毒性作用。的一种

8、毒素，对动物或人的肠有毒性作用。根据对热的耐受性不同分为：根据对热的耐受性不同分为：不耐热肠毒素不耐热肠毒素 (Heat-labile enterotoxin,LT)耐热肠毒素耐热肠毒素 (Heat-stable enterotoxin,ST)不耐热肠毒素不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)LT-先以其B亚单位与小肠上皮细胞上的神经节苷脂受体牢固结合，并形成通道，毒素的A亚单位经此通道进入细胞内，活化胞内腺苷酸环化酶，导致cAMP 浓度急剧上升，使肠细胞分泌机能亢进，溢出，因而造成水和电解质大量积蓄于肠管。临床上水样腹泻和迅速脱水的症状。临床上水样腹泻和迅速脱水

9、的症状。100加热10-30分钟不失活 ST 的毒性作用与激活小肠上皮细胞鸟苷酸环化酶，导致胞内cGMP增多，从而引起肠内水盐代谢不平衡。ST无免疫原性。耐热肠毒素耐热肠毒素(Heat-stable enterotoxin,ST)引起婴幼儿腹泻的重要病原菌，常限于几种特异的血清型。不侵袭肠细胞，也不产生经典的LT和ST，菌体紧密粘附于肠上皮细胞表面或嵌入肠上皮细胞膜形成的一种杯状凹陷并引起局部肠绒毛的萎缩或消失。EPEC的致病力与毒力因子、粘附因子及Vero细胞毒素有关。（二）肠致病性大肠杆菌（二）肠致病性大肠杆菌 (Enteropathogenic E.coli,EPEC)主要特征是侵入肠粘

10、膜上皮细胞并主要特征是侵入肠粘膜上皮细胞并在其中繁殖，最终导致细胞死亡而在其中繁殖，最终导致细胞死亡而发生痢疾样血粘液便。发生痢疾样血粘液便。能引起出血性结肠炎，还与人的溶血性尿毒综合征有关。（四）肠出血性大肠杆菌（四）肠出血性大肠杆菌近几年发现的一类致腹泻的大肠杆菌。五）肠凝集性大肠杆菌五）肠凝集性大肠杆菌 (Enteroaggregative E.coli,EAggEC)n粘附素菌毛是ETEC一类特有的菌毛，其上含有的大量能识别相应宿主小肠上皮细胞受体的亚单位蛋白质分子通常称作粘附素(adhesin)。n粘附素有K88(F4)、K99(F5)、n987P(F6)、F41、F42及F17（F

11、Y或Att25）,粘附素粘附素1、形态和培养特性 麦康凯琼脂上形成红色菌落，在伊红美蓝琼脂上为中心暗蓝黑色并有金属闪光的菌落。2、生化鉴定 接种TSI琼脂（发酵乳糖或蔗糖使斜面和底层变黄，不发酵乳糖或蔗糖，仅发酵葡萄糖时，底层变黄，斜面变红）。常规的生化项目鉴定。3、血清型鉴定:O、K、H4、ETEC毒力因子鉴定三、三、E.coli 常常规分离鉴定方法规分离鉴定方法KELISA免疫荧光乳胶凝集试验四、产四、产ETEC E.coli 的分离与鉴定的分离与鉴定ELISA:LT/STPCRn疫苗：疫苗：n针对黏附素的菌苗或亚单位苗，针对黏附素的菌苗或亚单位苗，n针对肠毒素的类毒素苗或亚单位苗，针对肠

12、毒素的类毒素苗或亚单位苗，n基因工程菌苗等基因工程菌苗等n药物治疗药物治疗:经药敏试验选用药物经药敏试验选用药物n存在问题：耐药菌株大量出现，继发感染存在问题：耐药菌株大量出现，继发感染.防治防治二、沙门氏菌二、沙门氏菌 (SalmonellaSalmonella)一大群寄生于人和动物肠道中，生化反应和抗原结构相似的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽胞直杆菌，绝大多数成员对人和动物有病原性，能引起人和动物的败血症，胃肠炎，甚至流产，也是人类食物中毒的主要病原之一。1 1，形，形 态态nG-、无芽孢的直杆菌，兼无芽孢的直杆菌，兼性厌氧，周生鞭毛运动性厌氧，周生鞭毛运动n大小大小(0.6-1)(2-3)m

13、，n(除鸡沙门氏菌和鸡白痢沙除鸡沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌等菌种外，都有周门氏菌等菌种外，都有周身鞭毛。身鞭毛。)一、生物学性状一、生物学性状2,2,染色及培养特性：染色及培养特性：n多数特性与埃希氏菌属相似多数特性与埃希氏菌属相似n在肠道杆菌鉴别或选择性培养基上，在肠道杆菌鉴别或选择性培养基上，n多数菌株因不发酵乳糖而形成无色菌落多数菌株因不发酵乳糖而形成无色菌落在血琼脂上在血琼脂上革兰氏染色的沙门氏菌革兰氏染色的沙门氏菌生化特性生化特性 多数发酵葡萄糖产酸产气，在三多数发酵葡萄糖产酸产气，在三糖铁琼脂上常产生糖铁琼脂上常产生H H2 2S S，多数不发酵，多数不发酵乳糖，不产吲哚，不分解尿素

14、，甲乳糖，不产吲哚，不分解尿素，甲基红试验阳性基红试验阳性n主要有O和H。n少数菌有包膜抗原，一般认为与毒力（virulence）有关，故称Vi抗原。n 另外还有其他表面物质，如菌毛等四种抗原。3 3，抗原结构，抗原结构（一）（一）DNA同源群同源群 DNA杂交试验（DNA相关度）分为7个 DNA同源群。（二）血清学分群（二）血清学分群 四种抗原中，只有O抗原是每个菌株均有的成分，以1，2，3等阿拉伯数字表示。1个菌株可含1种或几种O抗原，这种抗原耐100 2.5h或121，2h不破坏其抗原性，其特异性不易丧失或变异。3,抗原结构二、分群和定型二、分群和定型O抗原是本菌血清分型和分群的基础。凡

15、含有共同O抗原的各个血清型均归为一个群。因此，本属细菌分为A、B、C1-C4、D1-D2、E1-E4、F、G1-G2、H-Z、，O51-O63，O65-O67等51个血个血清群，共包括清群，共包括58种种O抗原和抗原和63种种H抗原。抗原。引起人和动物疾病的大多数属于A-E群。沙门氏菌的抗原有时发生变异，H-O，S-R，V-W（Vi变异）和位相变异。位相变异。n血清学定型血清学定型 n用用O O、H H和和ViVi单因子血清作玻片凝集试单因子血清作玻片凝集试验来鉴定待检菌株的血清型（抗原结验来鉴定待检菌株的血清型（抗原结构）的方法构）的方法n化学定型化学定型 n 根据沙门氏菌细胞壁多糖成分，提

16、取根据沙门氏菌细胞壁多糖成分，提取单糖进行分析单糖进行分析n噬菌体分型噬菌体分型沙门氏菌定型沙门氏菌定型侵袭力侵袭力 沙门氏菌可侵入小肠粘膜上皮细胞，并穿越上皮细胞层到达上皮下组织。在此部位被吞噬细胞吞噬，但不被杀灭而能在细胞内继续繁殖。内毒素内毒素 沙门氏菌死亡后释放的内毒素可引起宿主体温升高、白细胞数下降；大剂量时导致中毒症状和休克。内毒素可激活补体系统生成趋化因子，吸收白细胞致肠道局部发生炎症。肠毒素肠毒素 类似ETEC菌株产生的肠毒素。三、致性三、致病性三、致病性（一）致病物质（一）致病物质n（二）所致疾病（二）所致疾病 n n 广泛的动物宿主范围广泛的动物宿主范围n （1）专嗜沙门氏菌）专嗜沙门氏菌n （2）偏嗜沙门氏菌）偏嗜沙门氏菌n （3）泛嗜沙门氏菌）泛嗜沙门氏菌n（一）概（一）概 况况n对未污染的被检组织可以直接在普通琼脂、血琼脂或鉴别培养基平板上划线分离。n但对已污染的被检材料常需要增菌培养基增菌后再进行分离n四、沙门氏菌的分离与鉴定四、沙门氏菌的分离与鉴定未污染者未污染者 污染污染 病病 料料在肠道杆菌鉴别或在肠道杆菌鉴别或选择性平板划线分离选择性平板划线分离用肠