非衍生化串联质谱法对氨基酸及肉碱检测程序的测量不确定度评估.docx
非衍生化串联质谱法对氨基酸及肉碱检测程序的测量不确定度评估陈月，于月新北部战区总医院生殖医学科辽宁省沈阳市I100oo基金项目：中国人民解放军军队后勤科研重点项目(BLIM9J012),辽宁省自然科学基金指导计划O摘要：目的对本实验室ABSCieXAPl3200MS/MS串联质谱仪及配套的美国PerkinEImer公司试剂在检测新生儿遗传代谢产物(包含氨基酸及肉碱)程序的测量不确定度实行评估，并针对其评估结果的意义进行讨论.方法根据医学实验室测量不确定度的评定与表达中的计算方法，采用批号不同的两种试剂盒对室内质控进行检测，时间各为20个连续自然日，保证在日常标本检测的前、后各进行一次质控品的检测，检测者不固定可随机更换，计算测量更现性引入的测量不确定度；整理卫生部临床检验中心在2018年和2019年的共四次新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的室间质评数据，包含20个氨基酸的室间质评数据、16个酰基肉碱的室间质评数据，计算偏倚引入的测量不确定度；根据测量复现性和偏倚两者各自引入的测量不确定度来计算相对合成标准不确定度以及相对扩展不确定度。最后目标扩展不确定度则采用卫生部临床检验中心下发的新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中氨基酸和酰基肉碱室间质评的允许总误差指标。结果LEU>ClT.MET、TYR.CIO、CI2、CI6、C18的相对合成扩展不确定度为11.80%-14.95%(k=2),ALA、PHE、VAL、CO、C2、C3、C4、C6、C8的相对合成扩展不确定度为15.46%-18.47%(k=2),都满足于目标不确定度的范围内,而C5的不确定度略高于目标不确定度，需要另行评估，结论通过非衍生化串联质谱法对氨基酸及肉碱检测程序的测量不确定度实行评估，不仅仅能够验证检验程序在整个检验过程中的检验质量问题并能及时做出相应的改进，而且打破项目参考值的上下限的局限，对实验室的技术人员解读检验数据方面提供了该实验室的范围参考和借鉴，更好服务于临床医生正确的判读报告。关键词：非衍生化；串联质谱法；氨基酸；酰基肉碱；测量不确定度EvaluationofmeasurementuncertaintyfordeterminationproceduresforaminoacidsandcarnitinebynondcrivativetandemmassspectrometryChenYue,YuYuexinDepartmentofReproductiveMedicine,NorthernTheaterGeneralHospital,ShenyangCity,LiaoningProvince110000Abstract:ObjectiveThemeasurementuncertaintyoftheABSClEXAPI3200MS/MStandemmassspectrometerandtheassociatedPerkinElmerreagentsinthelaboratoryinthedetectionofneonatalgeneticmetabolites(includingaminoacidsandcarnitine)wasevaluated,andthesignificanceoftheevaluationresultswasdiscussed.MethodsAccordingtothemedicallaboratory,evaluationandexpressionofuncertaintyofmeasurementofthecalculationmethodofusingbothbatchnumberdifferentkitstotesttheindrqualitycontrol,eachtimefor20consecutivenaturalday,ensurethedailysamplesbeforeandafterthedetectionofaqualityproduct,changedetectionisnotfixedrandom,calculatethemeasurementrepeatabilityintroducetheuncertaintyofmeasurement.ThePMIdatafromfourtandemmassspectrometryscreeningtestsofneonatalgeneticmetabolicdiseasesconductedbytheClinicalLaboratoryCenteroftheMinistryofHealthin2018and2019werecollected,including20aminoacidsand16acylcarnitine,andthemeasurementuncertaintyofbiasintroductionwascalculated.Therelativecompositestandarduncertaintyandtherelativeextendeduncertaintyarecalculatedaccordingtothemeasurementuncertaintiesintroducedbymeasurementreproducibilityandbiasrespectively.Finally,thetotalallowableerrorindexofaminoacidandacylcamitinecompartmentqualityassessmentforneonatalgeneticmetabolicdiseasescreeningissuedbytheClinicalLaboratoryCenteroftheMinistryofHealthwasusedfortheextendeduncertainty.ResultsTheevaluationofthemeasurementuncertaintyofaminoacidandcarnitinedetectionproceduresbynon-derivativetandemmassspectrometrycannotonlyverifytheinspectionqualityproblemsoftheinspectionproceduresinthewholeinspectionprocessandmakecorrespondingimprovementsintime,butalsobreakthelimitationoftheupperandlowerlimitsoftheprojectreferencevalues.Intermsoftheinterpretationoftestdatabylaboratorytechnicians,itprovidesarangeofreferenceandreferenceforthelaboratory,andbetterservestheclinicaldoctorstocorrectlyinterpretthereport.Keywords:non-deriVatization;Tandemmassspectrometry;Aminoacid;Acylcarnitine;Measurementuncertainty根据流行病学调查统计，新生儿患遗传代谢病的几率能达到5.3%匕%在我国，不同地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查发展不平衡，以致实验室质量水平差异显著，因此，室内质量控制和室间质评可作为实验室检测结果准确性和可靠性的一个标尺，更是实验室报告发出的客观依据。依据ISol5189:2012医学实验室质量和能力的要求,在整个检验工程中，每个实验室都应该评估每个用于报告标本被测量值的测量程序的不确定度，整理出适合各自实验室的参考范围，为正确解读报告作为参考。然而，在各类文献中相继出现血常规项目及临床化学检验常规项目的测量不确定度评估的相关报道"5J,但是应用非衍生化串联质谱法对滤纸干血斑氨基酸及酰基肉碱检测程序的测量不确定度评估报道较少。本研究主要对本实验室非衍生化串联质谱法在滤纸干血斑氨基酸及酰基肉碱的检测程序的测量不确定度实行评估。1材料与方法1.1 标本来源均为滤纸干血斑标本。1.1.1 测量复现性引入的测量不确定度评估的标本采用美国PerkinElmer公司非衍生化多种氨基酸及肉碱测定试剂盒。1.1.2 偏倚引入的测量不确定度评估标本采用原卫生部临床检验中心新生儿遗传代谢病串联质筛查中的氨基酸和酰基肉碱室间质评标本。1.2 仪器与试剂ABSCieXAPI3200MS/MS串联质谱仪、孵育振荡器（MBloo-2A）、PE试剂盒和溶剂包（包含萃取液和流动相）、甲醇。1.3 方法1.3.1 测量复现性引入的测量不确定度采用PE试剂盒A和PE试剂盒B分别检测室内质控品各20个连续自然日，每个自然日在日常标本检测前、后各检测I次质控品，检测者不固定可随机更换。13.2偏倚引入的测量不确定度统计原卫生部临床检验中心2018年和2019年新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸室间质评数据和酰基肉碱室间质评数据。采用MicrosoftExcel2007软件根据医学实验室-测量不确定度的评定与表达中的计算方法进行统计分析。133目标不确定度选择标准依据卫生行业标准，目标扩展不确定【6口采用原卫生部临检中心新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸和酰基肉碱室间质评的允许误差。2 .结果表一非衍生化串联质谱法对氨基酸及肉碱检测程序的测量不确定度评估结果评估项目测最小史性引入的测最不确定度偏倚引入的测砥不确定度()<n<(%)p«ei(%)(k=2)目标不确定度(%)评论(pmo!L)RMSKbaiS)UnACrefJ(bias)ALA1759.31127.227.234.420.734.488.5117.0225.0满足ClT312.7316.385.243.011.233.256.1612.3325.()满足LEU801.1435.674.452.750.692.845.2810.5625.0满足MET371.3120.435.5()3.380.753.466.5012.9925.0满足PHE624.2149.247.893.630.713.708.7217.4325.0满足TYR1163.4362.605.383.751.073.906.6413.2925.()满足VAL960.7273.597.663.570.773.658.4916.9725.0满足CO244.9816.476.723.730.813.827.7315.4630.()满足C2145.929.566.553.980.714.047.7015.3930.0满足C325.761.907.365.400.695.459.1618.3130.()满足C45.960.406.633.910.703.977.7315.4630.0满足C52.750.124.4815.311.2315.3616.0032.0030.()不满足C5DC1330.138.774.
