益生菌酒精性肝损伤.ppt
益生菌对酒精性肝损伤作用机制研究目的目的方法方法结果结果结论结论探究益探究益生菌类生菌类制剂对制剂对小鼠实小鼠实验性肝验性肝损害有损害有无预防无预防作用作用本实验以小鼠本实验以小鼠为研究对象，为研究对象，共分三组，并共分三组，并设对照组。先设对照组。先期给予一段时期给予一段时间的益生菌制间的益生菌制剂灌胃，而后剂灌胃，而后一次性用四氯一次性用四氯化碳和豆油溶化碳和豆油溶液对所有小鼠液对所有小鼠灌胃染毒；灌胃染毒；与对照与对照组比较组比较，益生，益生菌制剂菌制剂组肝损组肝损害程度害程度较轻较轻 益生菌益生菌制剂对制剂对小鼠实小鼠实验性肝验性肝损害有损害有预防作预防作用用 摘摘 要要1989年，年，Fuller定义：定义：益生菌是通过改善肠道菌群平益生菌是通过改善肠道菌群平平衡而对宿主健康产生有平衡而对宿主健康产生有益作用的活菌添加剂益作用的活菌添加剂Havenaar和和HuisIntVeld于于1992年扩展为年扩展为：通过改善内源性通过改善内源性性微生物性微生物,对动物或人类施加有益对动物或人类施加有益影响的单一或混合的活微生物影响的单一或混合的活微生物欧洲权威机构欧洲食品欧洲权威机构欧洲食品与饲料菌种协会与饲料菌种协会(EFFCA)于于2002年给出最新定义年给出最新定义 益生菌是活的微生物益生菌是活的微生物,摄入摄入充足的数量后充足的数量后,对宿主产生对宿主产生一种或多种特殊且经论证的一种或多种特殊且经论证的健康益处健康益处 1994年德国会议年德国会议益生菌是含活菌和益生菌是含活菌和/或死菌包括其或死菌包括其组分和产物的细菌制品组分和产物的细菌制品,经口或其经口或其其他黏膜途径投放其他黏膜途径投放,旨在改善黏膜表旨在改善黏膜表面微生物或酶的平衡面微生物或酶的平衡,或者刺激特或者刺激特异性或非特异性免疫机制异性或非特异性免疫机制 2.2.扩扩 展展4.4.至至 今今3.3.修修 订订 益生菌益生菌定义演变定义演变1.首次定义首次定义前前 言言NanjiNanji等曾给肝病患者肠道引等曾给肝病患者肠道引入双歧杆菌入双歧杆菌,结果发现病人的结果发现病人的血氨降低血氨降低,同时食欲增加同时食欲增加,有有助于肝病的恢复。助于肝病的恢复。华方德等曾应用回春生治疗肝硬化华方德等曾应用回春生治疗肝硬化、肝炎、肝炎,结果证明可有效地改善肝结果证明可有效地改善肝脏蛋白质代谢功能脏蛋白质代谢功能,降低血中的内降低血中的内毒素水平。其疗效优于现有的治疗毒素水平。其疗效优于现有的治疗肝炎、肝硬化药物。肝炎、肝硬化药物。李春梅的临床动物实验研究结果也证实李春梅的临床动物实验研究结果也证实,经经益生菌制剂治疗后益生菌制剂治疗后,肠道内致病菌数量减少肠道内致病菌数量减少,双歧杆菌数量增加双歧杆菌数量增加,提示内毒素血症的好转提示内毒素血症的好转与肠道内致病菌的增殖受到抑制有关。与肠道内致病菌的增殖受到抑制有关。研究进展研究进展王清图的结果证明经双歧杆菌治疗后王清图的结果证明经双歧杆菌治疗后,可降低血可降低血中内毒素和血氨浓度。这些研究结果均证明益生中内毒素和血氨浓度。这些研究结果均证明益生菌制剂可减轻致病因素对肝脏的损伤菌制剂可减轻致病因素对肝脏的损伤,并有效地并有效地改善肝脏代谢功能。改善肝脏代谢功能。材料与方法材料与方法11 材料111 动物 昆明种健康小白鼠,体重18-20g,内蒙古大学动物饲养中心提供。四氯化碳溶液四氯化碳溶液 食用鲁花花生油食用鲁花花生油 苦味酸苦味酸 发酵乳发酵乳 乳酸菌发酵剂（活菌粉乳酸菌发酵剂（活菌粉）生理盐水生理盐水 ALT试剂盒试剂盒 AST试剂盒试剂盒 SOD试剂盒试剂盒 4%的多聚甲醛的多聚甲醛 70%乙醇乙醇80%乙醇乙醇 95%乙醇乙醇 无水乙醇无水乙醇 二甲苯二甲苯 石石 蜡蜡 PBS 伊伊 红红 苏木精苏木精 112 112 主要药品与试剂主要药品与试剂113主要仪器与设备主要仪器与设备 灌胃针，1ml、5ml注射器，电子秤，显微镜，包埋机，切片机，高速台式离心机、高速冷冻离心机;电子分析天平;电热恒温水浴锅;低温冰箱（-4-20 -80）;活菌活菌粉组粉组 发酵发酵乳组乳组 5只只5只只5只只5只只预防组预防组 雄鼠雄鼠雌鼠雌鼠对对照照组组 5只只5只只1.2 方法方法1.2.11.2.1 小鼠分组小鼠分组 在内大动物饲养中心取健康小白鼠，雄性在内大动物饲养中心取健康小白鼠，雄性2020只，只，雌性雌性2020只。分组如下（表只。分组如下（表1 1）：）：给药方法如下图（表给药方法如下图（表2）：预防组预防组 对照组对照组 17天天08.4.17-08.4.23 按照表按照表1给予活给予活菌粉和发酵乳灌菌粉和发酵乳灌胃胃(0.5ml/只只)正常饲养正常饲养第第8天天08.4.24 给予四氯化碳豆给予四氯化碳豆油溶液灌胃染毒油溶液灌胃染毒(40mg/kg.bw)给予四氯化碳给予四氯化碳豆油溶液灌胃豆油溶液灌胃染毒染毒(40mg/kg.bw)9-47天天08.4.25-08.6.2 按照表按照表1给予活给予活菌粉和发酵乳灌菌粉和发酵乳灌胃胃(0.5ml/只只)给予生理盐水给予生理盐水灌胃灌胃(0.5ml/只只)小鼠小鼠 称重称重 眼眶取血眼眶取血 离心离心 解剖解剖 取肝脏取肝脏 取脾脏取脾脏 多聚多聚 -80 多聚多聚 -80 甲醛甲醛 冰箱冰箱 甲醛甲醛 冰箱冰箱 固定固定 保存保存 固定固定 保存保存 脱水透明脱水透明 脱水透明脱水透明 包埋切片包埋切片 保留待用保留待用 包埋切片包埋切片 保留待用保留待用 HE染色染色 观察观察 HE染色染色 观察观察 1.2.2 1.2.2 小小 鼠鼠 处处 理理 肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的疾病之一。各种有害因素导致的肝损伤主要疾病之一。各种有害因素导致的肝损伤主要有病毒性肝炎，酒精性肝炎和药物性肝炎等有病毒性肝炎，酒精性肝炎和药物性肝炎等类型，其临床表现为肝坏死，脂肪肝，胆汁类型，其临床表现为肝坏死，脂肪肝，胆汁淤积、肝纤维化，肝硬化和肝癌等。目前，淤积、肝纤维化，肝硬化和肝癌等。目前，对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。CCL4肝损伤模型一直是筛选具有保肝降酶肝损伤模型一直是筛选具有保肝降酶作用药物的常用模型之一。其致病机理如下：作用药物的常用模型之一。其致病机理如下：讨讨 论论 损伤细胞膜结构和功能损伤细胞膜结构和功能 提高肝脏可溶性酶活性提高肝脏可溶性酶活性 肝脏毒物肝脏毒物 攻击肝细胞膜攻击肝细胞膜 CCl4 CCl3(活泼）活泼）脂质过氧化脂质过氧化 细胞膜损伤细胞膜损伤 坏死坏死 P450激活激活 磷脂分子磷脂分子 Ca2+激活肝细胞膜上磷酸化酶激活肝细胞膜上磷酸化酶抑制内质抑制内质网钙离子网钙离子泵泵与微粒体、脂质与微粒体、脂质、蛋白质发生共、蛋白质发生共价结合价结合CCl4致肝损伤机理致肝损伤机理 在对肝脏发病机制的研究中发现：内毒素是在对肝脏发病机制的研究中发现：内毒素是肝病发生、发展和恶化的最重要原因肝病发生、发展和恶化的最重要原因,可以直接或可以直接或间接地造成肝脏的损害。有的学者认为内毒素是间接地造成肝脏的损害。有的学者认为内毒素是各种原因肝损害的共同物质基础。因此各种原因肝损害的共同物质基础。因此,许多研究许多研究者试图通过某些改变或降低内毒素的方法来减轻者试图通过某些改变或降低内毒素的方法来减轻肝损害。传统常用的药物治疗效果并不十分令人肝损害。传统常用的药物治疗效果并不十分令人满意满意,近年有人提出用微生态疗法近年有人提出用微生态疗法,即补充益生菌即补充益生菌或益生元制剂作为肝病的辅助治疗。益生菌是肠或益生元制剂作为肝病的辅助治疗。益生菌是肠道原籍菌和常驻菌道原籍菌和常驻菌,而内毒素大多由革兰阴性菌即而内毒素大多由革兰阴性菌即腐败菌或过路菌产生腐败菌或过路菌产生,补充原籍菌从而抑制腐败菌补充原籍菌从而抑制腐败菌生长是降低内毒素的关键。生长是降低内毒素的关键。少数优势种群对整个少数优势种群对整个肠道菌群落起决定性肠道菌群落起决定性作用作用,补充优势菌即可补充优势菌即可抵制劣势菌的生长抵制劣势菌的生长 补充的优势菌参与机体的防御屏补充的优势菌参与机体的防御屏障障,其代谢产物乙酸、乳酸能阻止其代谢产物乙酸、乳酸能阻止致病菌在肠内的定植致病菌在肠内的定植(化学屏障化学屏障);定植于粘膜或皮肤细胞上皮之间定植于粘膜或皮肤细胞上皮之间的正常菌群形成生物膜样结构的正常菌群形成生物膜样结构,影影响过路菌或外袭菌的定植、占位响过路菌或外袭菌的定植、占位生长和繁殖（生物屏障生长和繁殖（生物屏障)免疫、营养及杀菌免疫、营养及杀菌 利用对人体无毒、无害、无利用对人体无毒、无害、无致病的耗氧性微生物致病的耗氧性微生物,使肠道使肠道局部环境的氧分子浓度降低局部环境的氧分子浓度降低,造成厌氧菌生长的微环境造成厌氧菌生长的微环境,促促进常驻厌菌的生长进常驻厌菌的生长,最终恢复最终恢复正常的微生态平正常的微生态平衡。衡。生态平衡理论生态平衡理论 生物拮抗理论生物拮抗理论 其其 他他 生物夺氧生物夺氧 作用机制作用机制 实实 验验 图图 片片实验图片实验图片小鼠生活照小鼠生活照实验照片实验照片灌胃灌胃实验图片实验图片眼眶取血（杀鼠）眼眶取血（杀鼠）实验图片实验图片组织脱水组织脱水实验图片实验图片组织透明组织透明实验图片实验图片包埋腊块包埋腊块参考文献：参考文献：1 张平张平.内毒素与肝脏损害内毒素与肝脏损害J.国外医学临床生物化学于与检验分册国外医学临床生物化学于与检验分册,1990,11(1)13-16.2 王跃王跃.双歧杆菌及其在体内的作用双歧杆菌及其在体内的作用J.国外医学临床生物化学与检验学分国外医学临床生物化学与检验学分册册,1988,9(3):12-15.3 康白康白.微生态学微生态学M.大连出版社大连出版社,1988.4 刘丹卓，赵新广肝损伤的现代医学研究进展与展望刘丹卓，赵新广肝损伤的现代医学研究进展与展望2007，29（3）50-515 袁铁铮姚斌袁铁铮姚斌 分子水平上益生菌研究进展分子水平上益生菌研究进展 2004,24(10)30-336 孙延波孙延波,等等.双歧杆菌对门静脉血内毒素影响的初步研究双歧杆菌对门静脉血内毒素影响的初步研究J.中国微生态学杂中国微生态学杂志志,1991,3(1):17-19.7 蒋寒青蒋寒青,等等.双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究J.中国微中国微生态学杂志生态学杂志,1995,7(2):32-34.8 Nanji AA,Khettry,U,Sadrzadeh SMH.Proc Soc Exp BiolMed.1994,205(3):243-247.9华方德华方德,等等.应用微生态制剂对肝硬化各型肝炎治疗效果的观察应用微生态制剂对肝硬化各型肝炎治疗效果的观察J.中国微生态学杂中国微生态学杂志志,1990,2(1):28-30.10 春梅春梅,等等.双歧杆菌制剂对肝硬化患者内毒素血征的治疗作用双歧杆菌制剂对肝硬化患者内毒素血征的治疗作用J.临床消化杂临床消化杂志志,1994,6(1):4.11王清图王清图,等等.双歧杆菌制剂对肝硬化病人血氨和内毒素的影响双歧杆菌制剂对肝硬化病人血氨和内毒素的影响J.中国微生态学杂中国微生态学杂志志,1996,8(4):29-30.12 王跃王跃.双歧杆菌及其在体内的作用双歧杆菌及其在体内的作用J.国外医学临床生物化学与检验学分国外医学临床生物化学与检验学分册册,1988,9(3):12-15.13 卜淑蕊卜淑蕊,朱菊朱菊 益生菌制剂治疗内毒素肝损害研究进展益生菌制剂治疗内毒素肝损害研究进展 2001,18(5)301-30214 李明华，张大伟，楚杰，郝永任，王少杰李明华，张大伟，楚杰，郝永任，王少杰 益生菌的作用及其在食品中的应用益生菌的作用及其在食品中的应用 2006,8(8)72-7415 阂钟熳阂钟熳 牛天贵牛
