茂名地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究.docx
茂名地区新生儿葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究李富，林丽琴，魏林燕，陈海玲，吴春红茂名市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心（广东省，茂名市，525000）【基金课题】：广东省茂名市科技计划项目项目名称：茂名地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氯酎缺乏症基因突变型研究项目编号：0131通讯作者：林丽琴O摘要目的：探讨广东省茂名地区新生儿葡萄糖4-磷酸脱氢函缺乏症（G6PD）基因突变类型及特征。方法：选取2018年1月至2019年11月我院召回的经茂名市新生儿疾病筛查中心筛查的G6PD可疑阳性新生儿785例,采用G6PD/6PGD荧光比值法法检测G6PD酶活性；采用多色探针荧光PCR熔解曲线法（MMCA）对新生儿干血斑样本进行G6PD基因突变检测。结果：785例新生儿中检出酶活性缺乏者625例，占79.62%,男性和女性醉活性正常、中度缺乏和重度缺乏新生儿比例存在显著差异（P<0.05）:785例新生儿中共检出706例G6PD基因突变，总突变率89.94%,共检出10种单一基因突变类型，占97.17%,共检出14种复合基因突变，占2.83%,其中c.1388G>A、c.1376G>T和c.95A>G是居前三位的热点突变类型，合计占78.90%：99例男性G6PD基因突变样本，均表现为G6PD酹活性缺乏,207例女性G6PD基因突变样本中,56.04%表现为G6PD酶活性缺乏，43.96%G6PD酶活性正常C结论：c.1388G>Ac.l376G>T和c.95A>G是茂名地区G6PD缺乏症的热点突变，G6PD基因型和表型致性存在明显的性别差异，在男性患儿明显更高；单独酶活性检测易导致女性杂合突变漏诊，应结合基因突变综合分析以提高检出率。关键词葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症：新生儿；基因突变：荧光PCR溶解曲线法Studyongenemutationofglucose-6-phosphatedehydrogenasedeficiencyinneonatesinMaoming1.ifu,Linliqin,Weilinyan,Chenhailing,WUChUnhOngMaomingWomenandChildren*SHealthHospitalNeonatalDiseaseScreeningCenter,Maoming,GuangdongProvince.AbstractObjective:Toexploregenemutationtypesandfeaturesofglucose-6-phosphatedehydrogenase(G6PD)deficiencyinneonatesinMaoming,Guangdong.Methods:Atotalof785suspectedG6PD-positiveneonatesscreenedbytheNeonatalDiseaseScreeningCenterofMaomingCitywereselectedfromJanuary2018toNovember2019andrecalledbyourhospital.G6PDenzymeactivitywasdetectedbyquantificationmethodofenzymeactivitygenemutationtestwasconductedfordriedbloodspot(DBS)samplesbymulticolormeltingcurveanalysis(MMCA).Results:Amongthe785neonates,therewere625caseswithenzymeactivitydeficiency(79.62%).Thereweresignificantdifferencesinproportionofneonateswithnormal,moderatelydeficientandseverelydeficientenzymeactivitybetweenthemaleandthefemale(P<0.05).Amongthe785neonates,therewere706caseswithG6PDgenemutations,withtotalmutationrateof89.94%.Therewere10kindsofsinglegenemutation(97.17%),and14kindsofcompoundgenemutation(2.83%).Thec.1388G>A,c.1376G>Tandc.95A>Gwerethetopthreehotmutationtypes,accountingfor78.90%intotal.AmongtheG6PDgenemutationsamplesfromthe99males,therewaslackofG6PDenzymeactivity.AmongtheG6PDgenemutationsamplesfrom207females,therewere56.04%ofthemwithlackofG6PDenzymeactivity,and43.96%withG6PDnormalenzymeactivity.Conclusion:c.1388G>A,c.l376G>Tandc.95A>GarehotmutationsofG6PDdeficiencyinMaoming.TherearcsignificantgenderdifferencesinconsistencybetweenG6PDgenotypeandphenotype,whichissignificantlyhigherinthesingledetectionofenzymeactivityiseasytoresultinmisseddiagnosisofheterozygousmutationsinthefemale.Thecomprehensiveanalysisofgenemutationshouldbecombinedwithtoimprovedetectionrate.KeywordsGlucose-6-phosphatedehydrogenasedeficiency;NeOnate;GenemutationMulticolormeltingcurveanalysis葡萄糖-6-磷酸脱氢前(Glucose-6-phosphatedehydrogenase»G6PD)缺乏症一种伴X-连锁不完全显性遗传病,一般情况下患者并不表现出典型的临床症状，但在特定诱因下，如感染，食用蚕豆或服用具有氧化作用的相关药物(磺胺类、伯氨瞳咻类等)时，患者可出现急性溶血性贫血、黄疸等症氏叫据统计，世界批注A讣经批注A2:筛查批注 IA3）:我；：.:'i的可疑G6PD阳性新生儿785例，其中女性225例，男 性560例：年龄8h22d.平均<8.31 ±2.53） <1：临床表 现为批注A4:同时进行批注（A5:删除批注A6J:标本采集：新生儿入院后于足跟外恻或内侧 处采血，滴加在采血淀纸上，共采集3个直径不小于 8mm的血班，自然晾干后，行G6PD/6PGD荧光比值法 检测G6PD酶活性：剩余血斑放入清洁塑料袋内密封， 于4C条件卜.保存,待进行新生儿G6PD基因突变检测.范围内G6PD缺乏症发病率达4.9%,并表现出明显的地域差异，在我国呈“南高北低"分布H（广东省是G6PD缺乏症高发地区，茂名地区20082018年的新筛中心筛查数据显示，G6PD阳性率达7.58%,但目前茂名地区新生儿G6PD基因突变特点尚未见诸报道。本研究采用多色探针荧光PCR溶解曲线法（multicolormeltingcurveanalysis*MMCA）对广东省茂名市新生儿G6PD基因突变进行检测，以期了解本地区新生儿G6PD基因突变类型及特点，为本地区新生儿G6PD缺乏症诊断和防治提供依据。现报道如下。1资料与方法1.1 一般资料本研究选取2018年1月至2019年11月坡院召回的经茂名市新生儿疾病皤乙杳中心筛查的G6PD可疑!阳性新生儿785例，其中女性225例，男性560例；年龄8h22d,平均（8.31+2.53）d；临床表现为病理性黄疸，ABo溶血,贫血等：在获取监护人充分知情同意后，同时!进行b6PDiW活性检测（G6PD/6PGD荧光比值法）和基因突变检测（MMCA法）。I1.2 方法I（1）标本采集：新生儿入院后于足跟外侧或内侧处采血，滴加在S&S903采血滤纸上，共采集3个直径不小于8mm的血斑，自然晾干后，行G6PD/6PGD荧光比值法检测G6PD酶活性：剩余血斑放入清洁塑料袋内密封，于4"C条件卜.保存，待进行新生儿G6PD基因突变检测。（2）G6PD酶活性检测：采集足跟静脉血，采用G6PD/6PGD荧光比值法检测G6PD酶活性，使用AutoTRFIA-2自动荧光免疫分析仪进行检测，试剂盒购自广州市丰华生物工程有限公司，严格按说明书进行检测。结果判定：G6PD6PGD0.95为正常，0.7G6PD6PGD<0.95为轻度缺乏，0.5G6PD6PGDV0.7为中度缺乏，G6PD/6PGDV0.5为重度缺乏。（3）多色探针荧光PCR熔解曲线法检测G6PD基因突变：采集的干血斑使用打孔器打下2个3mm纸片，采用Lab-Aid824型全自动核酸提取仪（厦门致善生物科技有限公司）提取DNA样本，DNA试剂盒为配套试剂盒，按说明书步骤严格执行。提取样本采用实时荧光PCR扩增仪扩增后，应用G6PD基因突变检测试剂盒（厦门致善生物科技有限公司）检测。参照试剂盒说明书对样本基因型进行判读，该试剂盒可用于检测中国人群常见的16种G6PD基因突变类型。1.3 统计学方法使用SPSS20.0软件进行数据统计，计数资料以率表示，采取/检验。所有检验均采取双侧检验，检验水平a=0.0502结果2.1G6PD酶活性检测结果785例新生儿中检出酶活性缺乏者625例，占79.62%,在男性和女性酶活性正常、中度缺乏和重度缺乏新生儿比例存在显著差异(P<0.05),具体见表1。表1G6PD酶活性检测结果(例，%)组别正常轻度缺乏中度缺乏重度缺乏男(n=560)51(9.11)I(0.18)97(17.32)411(73.39)女(n=225)109(48.44)17(7.56)31(13.78)68(30.22)Z2值150.05638.9881.447125.765P值0.0000.0000.2240.0002.2茂名地区新生儿G6PD基因突变情况茂名地区785例新生儿样本中共检出706例G6PD基因突变样本，男性499例，女性207例，总突变率89.94%(706/785)；共检出IO种单一基因突变类型，占97.17%(686/706):共检出14种复合基因突变，占2.83%(20/706):其中占比排前三位的分别是c.1388G>A、c.I376G>T和c.95A>G,合计占78.90%(557/706)。见表2。表2706例新生儿G6PD基因突变情况(例)突变类型男女合计比例(%)c.!388G>A1647824234.28c.1376G>T1378622331.59c.95A>G31619213.03c.871G>A4020608.50c.392G>T1021314.39c.1024C>TIl11223.12c.487G>A1450.71
