化妆品中2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐等15种原料、抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料、联苯乙烯二苯基二磺酸二钠等5种原料的检验方法.docx
6.化妆品中2-氨基-4-羟乙氨基茴香酸硫酸盐等15种原料的检验方法7 .化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法8 .化妆品中联苯乙熔二苯基二磺酸二钠等5种原料的检验方法附件6化妆品中2.氨基-4-羟乙氨基茴香醴硫酸盐等15种原料的检验方法Determinationof5-(2-hydroxyethylamino)-2-methoxylanilinesulfateandother14kindsofcomponents1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中2.氨基4.羟乙氨基茴香酸硫酸盐等15种原料的含量。本方法适用于染发类化妆品中2-氨基4羟乙氨基茴香酸硫酸盐等15种原料含量测定。化妆品中的原料成分以多种形式存在，如硫酸盐、盐酸盐等，当多种形式同时存在时，应以其中的一种形式表示。本方法所指的15种原料包括2-氨基-4-羟乙氨基茴香酸硫酸盐、羟苯并吗咻、2,6-二羟乙基氨甲苯、3-硝基对羟乙氨基酚、2-甲基-5-羟乙氨基苯酚、羟乙基3,4.亚甲二氧基苯胺盐酸盐、4-羟丙氨基-3-硝基苯酚、HC黄4号、5-氨基-6-氯邻甲酚、HC黄2号、5-氨基-4-氯邻甲酚、羟乙基2硝基对甲苯胺、分散紫1号、HC橙1号和HC红1号。化妆品安全技术规范(2015年版)7.2化妆品中对苯二胺等32种组分检验方法中部分原料对本方法存在干扰，如样品中同时含有相互干扰的成分，需调整流动相比例排除干扰或通过质谱确证方法确证。5.3项参考色谱条件1下的干扰情况如下：2-氯对苯二胺硫酸盐、邻氨基苯酚和2.甲基间苯二酚对2.氨基4.羟乙氨基茴香酸硫酸盐有干扰；2硝基对苯二胺对羟苯并吗咻有干扰；N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐对2,6-二羟乙基氨甲苯有干扰；甲苯-3,4-二胺对3硝基对羟乙氨基酚有干扰；6氨基间甲酚和N,N二乙基甲苯2,5-二胺盐酸盐对2-甲基-5-羟乙氨基苯酚有干扰；苯基甲基毗嗖咻酮对4-羟丙氨基-3-硝基苯酚有干扰；1,5-蔡二酚对5-氨基-6氯邻甲酚有干扰；32种原料和15种原料在5.3项参考液相色谱条件1下的分离图谱见附录A。2方法提要样品提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，根据保留时间和紫外光谱定性，峰面积定量，以标准曲线计算含量。本方法对2-氨基-4-羟乙氨基茴香健硫酸盐等15种原料的检出限、定量下限及取样量为0.5g时的检出浓度及最低定量浓度见表K表115种原料的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号原料名称检出限皿)定量下限(g)检出浓度<gg)最低定重浓度(gg)2-氨基-4-羟乙氨基茴香7.5×10-32.0×102I酸硫酸盐30802羟苯并吗咻7.0x10-32.0×10'2288032,6-二羟乙基氨甲苯2.5×1037.0×103102843.硝基对羟乙氨基酚4.0x10-31.0x10-2164052-甲基-5-羟乙氨基苯酚7.0×1032.0×1022880羟乙基-3,4-亚甲二氧基2.0x10-25.0×1026苯胺盐酸盐8020074-羟丙氨基3.硝基茉酚5.0x10-31.3×10-220528HC黄4号,o×o22.5×10-24010095.氨基6氯邻甲酚8.0x10-32.0×10-2328010HC黄2号3.0×103.o×o21240115.氨基氯邻甲酚5.0x10-31.5×10'2206012羟乙基-2-硝基对甲苯胺2.5×1037.5×103103013分散紫1号4.0x10-31.0×10'2164014HC橙1号5.0×1031.5×102206015HC红1号7.0x10-32.0x10-228803试剂和材料除另有规定外本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。3.1 无水乙醇。3.2 乙晴，色谱纯。3.3 亚硫酸氢钠。3.4 乙酸核。3.5 0.02mol/L乙酸钺溶液:称取。54g乙酸钱(3.4),加水至IooomL,经0.45m滤膜过滤。3.6 标准物质：参考附录B。3.7 标准储备溶液称取各原料对照品0.1g（精确到0.0001g）,分别置IOmL容量瓶中，以2g/L亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇（3.1）（1+1）的混合溶液溶解并定容至IOmL,制成浓度约为10g/L的各原料标准储备溶液。以下原料在上述溶剂中的溶解性较差，可分别采取如下措施：2-氨基Y.羟乙氨基茴香酸硫酸盐直接用2g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；分散紫1号、HC黄4号、HC黄2号和HC红I号需将称样量减少至20mg（精确到0.01mg）,再用无水乙醇（3.1）溶解定容，配成浓度约为2g/L的各原料标准储备溶液。储备溶液保存于04冰箱中，应于48小时内使用。4仪器和设备4.1 高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。4.2 天平。4.3 超声波清洗器。4.4 离心机。4.5 涡旋振荡器。5分析步骤5.1 混合标准系列溶液的制备分别取适量标准储备溶液（3.7）,用无水乙醇（3.1）+水（1+1）稀释定容，配制成浓度为5mg/L、50mgL100mgL>200mg/L>30Omg/L、400mgL>500mg/L的混合标准系列溶液。临用现配。注：实验室可根据实际情况调整合适的标准系列溶液浓度范围。5.2 样品处理称取样品0.5g（精确到0.0OIg）于IOmL具塞比色管中，加无水乙醇（3.1）+水（6+4）的混合溶液至IOmL刻度，涡旋混匀，冰浴超声15min°离心,取上清液经0.45m微孔滤膜过漉，滤液作为待测溶液，并尽快测定。根据实际样品的检测情况可对称样量或定容体积进行调整。5.3 参考色谱条件1色谱柱：C18柱（4.6mmx250mm,5m）,或等效色谱柱；流动相：流动相A：乙睛（3.2）；流动相B：0.02mol/L乙酸镂溶液（3.5）；梯度洗脱程序:时间(min)流动相A(%)流动相B(%)01090152575255545306238311090401090流速：LOmL/min；检测波长：HC黄4号、HC黄2号、HC橙1号为425nm；分散紫1号、HC红1号为520nm；其它原料在23Onm检测：柱温：30；进样体积：5L°5.4 参考色谱条件2色谱柱：C18柱(2.1mm×100mm,2.7m),或等效色谱柱；流动相：流动相A：乙月青(3.2)；流动相B：0.02molL乙酸筱溶液(3.5)；梯度洗脱程序：时间(min)流动相A(%)流动相B(%)0109082575139010151090201090流速：0.2mL/min；检测波长：同参考色谱条件1；柱温：30；进样体积：2L°5.5 测定在“5.3”或“5.4”色谱条件下，取混合标准系列溶液(5.1)分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。取“5.2”项下的待测溶液进样，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各原料的浓度。按“6”计算样品中各原料的含量。6分析结果的表述6.1 计算D×p×V三×100m×106式中：8化妆品中2-氨基-4-羟乙氨基茴香酸硫酸盐等15种原料的质量分数，%；P从标准曲线上得到待测原料的质量浓度，mg/L；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g；D稀释倍数(不稀释则取1)。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%o6.2 回收率和精密度15种染发剂原料的提取回收率在85%115%之间，方法回收率在85%114%之间，相对标准偏差在0.7%-9.7%之间(n=6)。gCL A 6a&w J 68 8 2 ZL IM ZseE 二 J688dzJZ6S.0Z - 6 1Ry i H L i- A amH Q J7图谱0.35-0.30-0.25-0.20W0.15-0.10-0.05-0.00-0.002004006.0080010：0012：0014：0016：0018：0020.0022：0024：0026：0028：0030：0032：OC分钟图I混合标准溶液在23Onm下的色谱图(参考色谱条件1)1：2氨基4羟乙氨基茴香醍硫酸盐(10.178min)；2：羟苯并吗咻(11321min)；3：2,6-二羟乙基氨甲苯(12.655min)；4：3-硝基对羟乙氨基酚(14.342min)；5：2-甲基-5-羟乙氨基苯酚(15.263min)：6：羟乙基3,4.亚甲二氧基苯胺盐酸盐(16.694min)；7：4羟丙氨基3硝基苯酚(17.341min)；8：HC黄4号(19.470min)；9：5-氨基-6-氯邻甲酚(20.597min)：10：HC黄2号(22.889min)；11：5-氨基4氯邻甲酚(23.957min)：12：羟乙基硝基对甲苯胺(25.782min)；13：分散紫1号(26.893min)；14：HC橙1号(29.819min)：15：HC红1号(30.378min)069.w0L0.002.004.006.00.0010.0012.0014.001600180020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0C分钟图2混合标准溶液在425nm下的色谱图(参考色谱条件1)8：HC黄4号(19.470mm)；10：HC黄2号(22.89Omin)；14：HC橙1号(29.820min)0.1Oi0.002.004.006.0080010.0012.0014.00160018.00200022.0024.0026.0028.0030.0032.0C分钟图3混合标准溶液在520nm下的色谱图(参考色谱条件1)13：分散紫1号(26.894min)；15：HC红1号(30.380min)0.000.00分钟10.0011.0013.0014.0015.0C4.005.I图4混合标准溶液在23Onm下的色谱图(参考色谱条件2)1：2氨基4羟乙氨基茴香酸硫酸盐(3.850min)；2：羟苯并吗咻(4.321min)；3：2,6二羟乙基氨甲苯(5.303min)；4：3硝基对羟乙氨基酚(6.043min)；5：2-甲基5羟乙氨基苯酚(6.557min)；6：羟乙基-3,4-亚甲二氧基苯胺盐酸盐(7.077min)；7：4-羟丙氨基3-硝基苯酚(7.752min)；8：5-氨基-6-氯邻甲酚(8.682min)；9：HC黄4号(9207min)：10：HC黄2号(11.190min)；11：5-氨基4氯邻甲酚(11.
