过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响.docx

过氧化氢酶过表达对a粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响苟巧,魏志权，邵帅，佟鹏，王春燕，齐雪松，张伟，苏旭中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所，辐射防护与核应急中国疾病预防控制中心重点实验室，毒理学研究室，北京IoOo88摘要：目的研究过氧化氢酶（CAT）过表达对粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35TI内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响。方法构建PEGFP-CAT真核表达载体，经聚合酶链反应（PCR）,酶切和测序鉴定后，采用脂质体法将该重组质粒及其对照空载体转染至BERP35Tl细胞中，用G418筛选出具有抗性的细胞株，免疫印迹法鉴定CAT蛋白在各细胞株中的表达。通过免疫细胞化学法、噬喋蓝法、划痕愈合实验和锚着独立生长实验分别检测CAT过表达对BERP35TI细胞内DNA氧化损伤（8-0HdG水平）、细胞增殖（细胞存活率）、迁移（划痕相对平均宽度）和锚着独立生长能力（软琼脂克隆形成率）的影响。结果PEGFP-CAr经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实，目的基因CAT的序列完全正确；获得了CAr稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35TX-CAT-J0BERP35TI-CAF7细胞中CAr蛋白表达是对照空载体转染细胞BERP35Tl-PEGFP的5.72倍（P<0.01）,CATmRNA表达是后者的2.91倍（P<0.05）.与BERP35Tl-PEGFP细胞相比，BERP35T1-CAT-7细胞内DNA氧化损伤产物8-0HdG水平降低（P<0.05）,细胞存活率减少（P<0.05）,划痕相对平均宽度增大（P<0.05）,软琼脂克隆形成率降低（PVO.05）。结论过表达CA阿能通过降低细胞内DNA氧化损伤水平，抑制BERP35T1细胞增殖、迁移和锚着独立生长能力，从而部分逆转BERP35T1细胞的恶性表型。