丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）标准操作规程.docx

丙型肝炎病毒抗体检测(酶联免疫法)标准操作规程1.操作步骤：(1)配液：浓缩洗涤液用蒸镭水或去离子水20倍稀释。(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔(空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂)其余各孔加入100UL样本稀释液。加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。温育：用封版膜封版后，置37°C温育60分钟。(5)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。(6)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。(7)温育：置37°C温育30分钟。(8)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干(9)显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升)，轻轻振匀，370c避光显色30分钟。(IO)终止：每孔加终止液1滴(50微升)，轻轻振荡混匀。(11)测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长45Onm或双波长450nm/600-650nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。2.结果判断临界值(CUT/0FF)计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。(不足0.02按0.02计算)阳性判定:样品A值三临界值(CUTOFF)者判定为抗HCV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试)(3)阴性判定：样品A值临界值(CUTOFF)者判定为抗HCV阴性。