免疫分型教程.docx

4O一免疫分型教程正常骨髓免疫分型O1.c<nIo1.O1.81.兴。京上图是正常骨髓经CD45、CD71、CD33染色后组成的CD45/SSC.CD71/CD33双参数散点图；通过这两个组合，能够辨别骨髓的正常细胞、检查是否有异样细胞存在、评估细胞的成熟状况。CD45/SSC图中可见：1. CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2. 中等强度的CD45表达,SSC信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色与红色细胞群体）；3. CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4. CD45阴性，SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片；CD33/CD71图中可见：1 .CD33表达最强的单核细胞群体（绿色）；2 .粒细胞CD33表达较单核弱,不成熟粒表达CD71.成熟后不表达。3 .淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达CD33、CD71oCD11B/CD15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得CD1.1.B,粒细胞高表达CD15）:1,单核细胞（绿色）高表达CD1.1.B.CD15中等到表达；4 .粒细胞（蓝色与橘红色）高表达CD15,蓝色成熟粒CD1.1.B表达较橘红色不成熟粒细胞强,无趣髓细胞仅表达CD15而无CD11B。5 .T、B淋巴细胞不表达CDI5、CD1.1.B,NK细胞表达CDIIB而无CD15(红色细胞)。4,有核红细胞与碎片不表达CD15和CD11B。依据骨髓细胞CD45/SSC图中分布状况设门圈定各类细胞：R1.门为成熟淋巴细胞；R2门为正常单核细胞位置；R3门正常粒细胞位置；R4门为无趣淋巴细胞出现位芭；R5门为有核红细胞或细胞碎片位置；R6门为无趣筋细胞出现位置；白血病细胞通常会在R4、R6两门位置处出现。MO免疫分型M0:急性髓细胞白血病微分化型原始细胞在光镜下类似1.2型细胞核仁明显.胞浆透亮.嗜碱性,无嗜天青颗粒与AUer小体.髓过氧化酶(MPO)与苏丹黑B阳性细胞3马;电镜下,MPO(+)CD33或CD13等髓系标记可呈(+),淋巴系抗原通常为(一),但有时CD7+,TdT+部分急非淋白血病可表现CD7+,TdTo形态学：无趣细胞占骨健有核细胞9佻以上；肿瘤细胞不出现AUER小体；粒细胞缺少，MPo或苏单黑染色阴性。遗传学：染色体常有困难的异样，特殊是5和7号染色体。当病例伴T（9；22）时会出现淋系抗原。无趣细胞群体的FS和SS信号低.在CD45/SS点图中特征性地与无趣淋巴细胞区域相连。无趣细胞至少表达一种骨髓抗原：CD13.CD33,但完全缺乏髓系成熟分化抗原：CD1.IB.CD15和CDI6。相当一部分病例TDT阳性，但在肿瘤细胞上分布不均。肿癌细胞通常淋系抗原阴性，但有时也会表达CD7或CD4；H1.A-DR通常阳性，CD34则为阴性。有学者指出伴CD7和CD34同时表达的病人预后不佳。检测胞浆内MPO比CD33/CD13联合检测更为敏感。Mo中MPo阳性率一般小于3虬如大于3%则要判定为M1.。M0:H1.A-DR+,CD34+,CD13+A,MP0+,CD14-,CD1.1.b-,TdT-+to+/-H1.ADRC01302CD34CD3X>骨髓样本类似纯化的培育细胞，在CD45/SSC图中可见到数量占绝大多数的一群无趣细胞群体。这群异样细胞在的SSC信号较低，大小中等。无趣细胞CDI9、CD34阴性，但同时表达CD13和CD330CD13表达稍弱，且抗原表达较CD33不均一。白血病细胞占了全部细胞群体的96&H1.A-DR在这些健系细胞上不表达。这些无趣细胞表型的状况是：CD13阳性,CD33阳性,CD34阴性，H1.A-DR阴性。这个表型与AM1.-M3相以CIO0IO1IO2100!0410o10110?IO3IO4CDSIgG-CTR1.肿瘤细胞不表达CD71、CD117.CD18,CD1.1.b和CD1.5。CD64是阴性,但CD14表达。CD14表达强度比较弱与CD13相像。T细胞标记物CD2、CD5、CD3和CD7都不表达。在图中可视察到残存的一些T细胞。与阴性比照相比，CD4弱阳性表达。诊断：AM1.微分化型，CD34和H1.A-DR阴性。试验室进一步诊断:MPo(免疫组化)阳性,NSE阴性,46XY.t(3;5)(q25:q34)重要说明：本例中白血病细胞免型表型为：CD34-、H1.A-DR-.CD13+,CD33+.表面看与AM1.-M3相像。在很多无趣细胞胞浆内存在的颗粒会导致AM1.-M3的误诊。但FCM的数据供应了一些有价值的信息避开这个错误。详细总结如下：(1)表达CD14(克隆号IeU-M3),尽管表达有所降低；(2)SSC信号降低并且相对分散。这一点非常重要,因为AM1.-M3v的SSC信号比较集中,甚至M3v细胞中带有颗粒。另一重要信息是CD13表达下降甚至缺失而CD33强阳性（一种异样的CD13/CD33表达模式）。有时AM1.-M3可能会缺失表达CD13对于这些疑难病例须要借助分子遗传学和细胞遗传学诊断工具来建立正确的诊断。CD3FCCD38HTC10101(10'15FCG1.YFITC1011TD喏TC1°31°47FITC其他标记物如：Bce1.1.s（CD19,CD20,Kappa11.ambda）,CD1.O（CaIIa）,CD5（Tce1.1.s）,CD41（PIaIe1.et）都是阴性。光散射图中显示在前向散射光和表示颗粒度的侧向散射光有一群处于中间位置的细胞。这与组织学检测结果相一样。（暂无图）将光散射图中的异样细胞放置于CD45/CD14上显示发觉CD45阳性并CD14阴性（99%）。CD45表达强度低于成熟淋巴细胞，可能是由髓系细胞和未成熟无趣细胞组成。（暂无图）在H1.ADR/CD3等高图中发觉其中大部分DR阳性（81%）并且CD3阴性（T细胞受体）0这个表型可见于活化的T细胞和成熟B细胞（CD45强阳性）。DR表达于绝大多数髓系细胞、B细胞和活化的T细胞。CD34/CD38图中显示细胞CD34阴性并且CD38阳性。CD38可见到浆细胞、前B细胞、单核细胞、A1.1.细胞和绝大多数AM1.细胞。此处可排队浆细胞的可能性（CD45阴性），前B细胞还无法解除.单核细胞可解除（CD14阴性）。CD13/CD15等高图中显示大部分细胞（63）随系抗原CD13/CD15阴性。但此处供应了一丝线索，因为有些细胞（30表达低水平CD1.5。绝大部分AM1.M1-M6细胞同时表达CD13和CD1.5。从CD33"dT图中可以确定这些细胞源自髓系（CD33阳性）。无细胞表达TdT。这表明这些细胞是处于极早期的髓系细胞，可能AM1.-MO/M1。CDI1.b/GPA双参数图中也证明了这些细胞早期髓系的属性。GPA在这些细胞上弱表达。这种状况可见于早期系干细胞CCDI1.b可见于单核细胞、粒细胞，NK细胞不表达此抗原。这些细胞还同时表达CD7。这使人感觉有误，但现已知早期越系白血病细胞可偶然同时表达CD7。将这些结果综合来看支持MO或M1.的诊断。要用流式细胞仪来区分MO和M1.现还有困难,所以还要结合组织学检测的结论,如发觉有MPo阳性则支持M1.,如阴性则为M0。M1.免疫分型无趣细胞成群，RA1.S信号弱。M1.与MO很难区分,但M1.细胞大小与颗粒度较MO稍大，与原粒细胞接近。至少伴随一种髓系抗原：CD13或CD33o高表达H1.A-DR,CD34阳性但较MO弱,>3%的无趣细胞表达MPO,较Mo多。coi5ncXH2sg二8不表达CD1.IB,CD15,CD16等。M1.XD1.1.B+,H1.A-DR+,CD13+,CD33+,CD34+,CD14+1MPO+,TdT+to+/-M2免疫分型C8CtHSFfRCPFSGHetJMCD45RA1.S图中细胞分布广泛与M1.不同，这是因为M2细胞已进一步分化无趣细胞削减，粒细胞赠多并与B1.ASTW1.NDOWS区域内细胞相连。因细胞没有明显分群,很难将异样细胞与正常相区分，故设立多个门进行分析检测其成熟度抗原的表达状况。M2免疫表型与MI类似，H1.A-DR1CD33,CD13阳性。上图中可见无趣细胞CD33与CD71表达均比成熟粒细胞强。CD13表达强于CD330M2肿瘤细胞弱表达CD15与CDI1.B,说明细胞已分化。CD34表达显著降低。M2肿瘤细胞不表达CD5,CD7和TdT等抗原，如病例伴1(8:21),则常常表达CD19偶表达CD56。一般肿瘤细胞MPo强阳性。偶见形态为M2并伴但CD13-,CD33-,CD14-,而MPO+。细胞分布广泛，无趣细胞较M1.少。CD13和CD33阳性,且CD13表达高于CD33。.0*CO-Co-O-3d<1=8H1.ADR阳性，CD15弱阳性。叁-1.'C>FTCM2肿瘤细胞伴t（8,21）CD19阳性。M3免疫分型上图为M3V,少颗粒型早幼粒白血病细胞.细胞中颗粒少RA1.S信号低而集中.SS座标上出现大量肿瘤细胞。肿瘤细胞大，FS信号强°通过CD45/RA1.S双参图可辨别出M3与M3Vo下为经典M3多颗粒细胞的CD45/RA1.S和SS/FS图.Ja=BOSpOOO1.00800900寸00。0saopM3与M3V在免疫表型上无区分。M3肿瘤细胞特征性地不表达髓系早期标记物CD34和H1.A-DR；部分病例中CD9特征性地阳性，但不是完全特异。CD2在M3与M3V中会出阳性表达，在H1.A-DR阴性的病例中，与染色体1(15,17)异样相关。o'ao,o4CW4(MY4y11Co,oxio,iCWSFfTCCO1.>-O1.Sff1.-Sv肿瘤细胞CD33表达比正常粒细胞强与正常单核细胞相像，CD13表达多样。肿瘤细胞不表达晚期髓细胞分化抗原CD15.CD16和CDIIB。肿施细胞完全不表达CD15,与正常早幼粒细胞表达CD15相区分；正常早幼粒细胞细胞周期中含高比例S期细胞,而肿瘤细胞中几乎不见细胞周期，1(io1io*io3wffcccAS>O-&1.XH2弦4舌一crio1o2io,oCo1.oFITCO-b1.Ho-O-S66肿瘤细胞MPO阳性，上图中MPO与1.actoferin双染来区分成熟粒细胞。肿瘤细胞除表达CD2外，很少表达T或B系抗原。io,o2o,10tio*Hio1.O4K)G1.11TCCYTC41S2IGo1.HTC