免疫分型 基础介绍.docx

近年来白血癌的免监分5S已成为诊断血液恶性g<WS不行缺少的重要标准之一.早年曾用过的荧光显磔确或APAAP方法基本被废弃.国际上公认的通用的方法是流式组抱术(FCM入流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克Ii抗体(McAb)作分子探针,多卷数分析白金病细胞的细胞膜和钿88浆或西胞核的免疫表型，由此了解校测白血病细眠所S1.如鼠系列与其分化程度.1 ,流式细胞仪诊断白血法的依据FCM能快速，多整数，客观的定性又定量测定细胞腹、亚、核依抗原表达(2)至今尚未发觉白血病的特异抗原.(3)能用正常趣ffiJ的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化电新学说.即白血病细眼基因舁样.分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病.这群细胞充盈于骨髓，正常血细胞从多能干细胞分化.发官.蝴力功镣细跑的过程中,细抱找、细胞浆或跑核抗原的出慰表达塔多与刖戏趋至消逝与血细胞的分化发音阶段亲宓相关，而且表现出与组抱系列与其分化程度相关的特异性.因此，这些抗原的表达与否可作为裳别和分类血细胞的基础.白血病是造血系统的怒性肿瘤,在形态上变更虽相当大,但仍能表达正常血纽抱所具有的抗原,因而仍可依据只抗原的表达谱对白血病进行免疫分型，2 .流式细胞仪诊断臼血病的意义廿Se1.fi组抱是形态学分型的国½,FCM白血病免疫分组是对形态学分型的废撕卜充硒深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不行少的，对下列状况题义更大：用形态学.细胞化学染色不能确定细胞来源的白血病,形卷学为急性淋巴细胞白血病(A1.1.)或急慢未分化白血病(AU1.)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记.混合性白血病.部分St系臼血病.目前，免疫分型对粒殖抱和单核细抱白血病的蔡8躺有确定困造.慢性港巴野胸白血病.颔也J滋留白血病.(2)睢床预料；可依据抗原的表达状况预科病情的后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达,预后不好.疾病鉴利：可鉴测病程的发展,疗效,可进行母小残留白血病的桧S1.二.免疫分型常用的免疫标记与其意义1 .白血病阚冰5三T淋巴细胞白血洗：CD3、CDS.CD7.B淋巴纽抱白血病：CD10、CDI9,CD22.NKjffEffiesei1.I1.JS：CD16.CD56,CD57.髓系白血病：CD13.CD14.CD33.MPo(Sa过钠匕S6)t红白血病GIyA(血型段蛋白A1巨核细胞白血病：CD41.CD42、CD61.2 .白血病系列非特异恸i原CD34.H1.A-DR为早期纽用抗原,无系列特异性.可与CD38联合运用于免凌分配一般而含,干湘纽抱CD34+、H1.A-DR+.CD38-,原幽的CD34+.H1.A-DR*.CD38+,而研细胞(如早飒细胞)CD34H1.A-DR-.838+.3 .白血病分化阶段丽Tm5uSCD4.CD8.B细肥抗原:CO10.Cy(抱浆隰XSm1.g(表面膜免枝球蛋白ICD38和Cy1.g(施浆殛球罡白ICD11C.4 .白细胞共同抗原CD45为白细胞共同抗原，其表达在洌巴好抱最忘,单物纽泡，成熟皿0胞.早期造血细胞(b1.asts)依次减弱.红细施(中，晚幼红细胞,成解!细胞)不我达CD45.用SSCCD45PerCP双尊数分析可特别简洁物福糊口血液中的原始或成熟绸抱.用两个系列哪段特异性MCAb加CD45进行三色免疫荧光染色.经FS&SSC.MCAb1.nTuMcAbZ-PE.CD4SPerCP五叁数分析,可特异地分析原幼白血病短抱的免疫表型而不受成熟细.根的干扰.=.白血病与海巴痫免及分型1.AM1.MO:有低的SSC和FSC.在CD4S-SSC图上出现在淋巴钿胞位置上,至少表达一特异性标记如CD13或CD116,但MPO比CD13与CD33更灵敏.一般淋系标记阴性,但也可表达CD7或CD4.TKH1.A-DR.CD34阳柱,有些探讨表明C07与CD34共衰达在AM1.且预后差.M1.:流赴M1.与MoWI不易区分，M1.-ffiCD13+,CD33+.H1.A-DR,但834½½iJ于M0,可能表达部分CDI5.M2:MO与M1的主要区分是成熟度增E.b1.asts削域，CD15蛟M1姣显舌,CD34弱于M1,CD13郁爆达强于CD33,缈数病例H1.A-DR(一),CD45-SSC图显示从徵系b1.ast区至成熟骨髓细胞区的蜘带,CtMSSSC图有助于碇b1.asts比例.M3.高理粒性,具较高的SSC,但CD45校成总C少，多数状况H1.A-DR(一)或表达百娜，CD34少于M2.TKCDI3躬(+),可有CD2表达.M4与M5两型衣型相像，但M4较M5表达更多的CD34(+),较之M(XM1.M4与MS有更大的FSS和SSC,CD45SSC图上，成熟C出现在单核区，亚要的表型为CDI3、CD33.H1.A-DR.CD14和CDI5.CD33可表达强于CD13,CD33(+CD13(-1CD34(一)很可能为M5,但只出现在少数病人中,部分MS可见CD56(+1M6:M6较少见且特征不明显，一般H1.A-DR,834.CD13.CD33阳性，CD45-SSC图显示主要为红系成份.M7:巨核钿胞白血病，在AM1.中少于1%.TSCD61(GpHIa)和/或CD41(GP1.Ib-Ina)阳性.而留焉由于血小板砧酌在b1.asts上造成的昭阳性，可以用流式双色分析在EDTA存在下，SIGp11b111.a与CDM以削减激活血，J须的粘附.2 .A1.1.:A1.1.是儿童中最常见的恶性肿痛,约占全目除痴的25%,在成人,A1.1.约占急性白血病的25%,我们将A1.1.分为B祖Iff1.K生，CD10+或CD1.O-,前B如睡，BfiS1.型，T如触.B祖细雌AU.:在幼J恪)占A1.1.的65%70%,肯少年为55%60%,成人为50%.在儿童，约90%病例CD10÷.在幼儿只有少于50%病例CDIO+,b1.asts-f&FSC,SSC很少，是FAB标港的1.1.或1.2.一般TdT(*)H1.A-DR(+),CD19(+),此型又分为2个亚生!,CD10+ff1.CD10-,前者预后好，多JS病例CD24+,8M+,CD20我达造成熟度增加而物Q,B祖细胞被定义为S1.g-.苗8细抱型A1.1.:比亚里约占儿SJA1.1.的2S%,纽!STS为CD19,CD24,H1.A-DR+,抱浆CD22*,CD10+,TdT随CD20变更,CD34多为阳性,前B亚组被认为比B祖型预后史龙，这与t(1;19)出现相关并由此产生E2A-PBXI附合砥臼，它的衰毋为CD19+、CD10+.CD9+,不同程度CD20衰达，CDM-,确认叱表型有助于诊断基因上不确定的病例.BffifSSA1.1.:成熟B如的生A1.1.ttJfiA1.1.2%-5%IB轴战型A1.1.蛟之B祖如魁型A1.1.有更大的FSC和SSCz三CD45-SSC图上出现在淋巴和单核细施区域,即FAB标准的13,表型为CD19.CD20.CD22.CD24且sig(多数为IGM)多数病例CDIo+.但成熟抗原与S1.g使之区分于更早的B系A1.1.,坂少数礴B纽抱A1.1.无FAB-1.3形态.T-A1.1.:多数病例有大的FSC.SSC,在CD45-SSC图上可能出现在淋系未成和髓系未成*ff1.或单核细胞区,妥敛衣现为周像亚型，AS常见亚5?为皮质映期表达，CD1、CD2.COS.CD7,CD4/CD8双帕与极少腹表面CD3.TdT多为帕也另一常见亚型为皮质早期表达CD2.CDS.CD7,TCn成表达.«1®期亚型趣CD2.CD5、CD7、与CD3+CD4+CD3+CD8+,很少见TdT型.前T细胞相，表达CD7胞浆CD3+且无其它T妞忸抗原，T妞!蝴麻的祜征是丢失T妞胞抗原而视出其它异样抗原旭汆合型白血病：随播流式技术的广泛应用,我们发觉很多病例并不袋严格划分为港系或Ia系.真正的双表型病人多为t(9；22)或(11q23),现在杂合型的误诊率很高.IR用导致误诊的缘由是在分析中未镣解除非白妞胞.过度强周羽的非特异性结合，忽视了某些抗体缺乏系特异性，最于要的系特异性抗原在B系.T系.髓系分别为CD22.83和MP0.3 .CM1.:由于慢性期显舌0三S!分化，在CD45-SSC图上除了情系细能占主尉.只显示正常告留你.CM1.可蝇诊，CM1.起病与发展相对缓慢，慢慢期的持续1年左右最终发展为加速期和总变期.流式细腮技术对急变期亚组的诊断具有极i价伯.干脆影响到治疗效果.急变期CM1.主要表财Iff1.系,偶为海系，M性急受可表现出多种玲态包括未分化细胞.淋性急变具典型形态特征,3CD10+B祖电8A1.1.极少有T细胞型A1.1.4 .C1.1.:C1.1.细的主要为较正常淋巴纽抱梢大的小湖巴纽抱.免疫分型主要为:S1.gM.S1.gD弱表达.B系抗原为CD19.CD2O.CD43,CD79a与CD5共就，CD23表达使得C1.1.区舜帽僦淋巴疝MU,BD(C1.1.:CD23+,MC1.:CD23-),CD10-.CD23-、CD1.1.C和CD25.CD2O常弱表达,尽管C1.1.起病慢,但CI1.病人的生存率变更很大，有染色体异样的病预后不良，最常见的三联体trisony12.14q、13q.11q,免应表里上没有特异的变更而免疫表里的变更并不是提示染色体异样.鼠近有探讨表明=WWtnsonyI2与SIg,CD20表达度相关,与CD23-相关与FMC7相关.B型前淋巴细能白血病(B-D1.1.版C1.1.更为严IS,流式蛇悔技术在区分B-D1.1.和C1.1.上发挥很大作用，B-D1.1.多为C05-,CD22+,表达更强的sig.MU病人平均生存率不超过5年，与C1.1.在形蓉上很58区分，与C1.1.相像有CD5÷B祖纽的，但Sig表达强于C1.1.,且CD22-.另一与C1.1.难于区分的是FCC,细施为强Sig.CDS-.CD10+.CD23+,RB系表生：对于诊断为C1.1.,CD5.FMC7.CD22与SIg,CD20异样强衣安达的病例我们要考虑是否为D1.1.MCC或O1.的亚型(trisomy12)因为它们危急性更大.四.流式细犒义免疫分型试轮1.样本采集、运输、保存和操作。解本类型：适用于多片临床标本，如外周血、自髓穿剌液、做!活检物、淋巴样组纬舌检物、亚液、脑脊液、皮肤、粘膜(内窥镜活检物X斑针疗剌物等等.R浙诳剂的选择：外周血标本可采纳EDTA.ACD或肝素抗温.暇如用同一份血标本做白电S计数和流式分析,则应用EDTA抗凝，骨I#芽剌可用肝素.其他体液用EDTA,ACD或肝素均可,但保存的样本活性可能会建低,EDTA的优点是成熟随性细胞贴里造成的损失与血/J瓶聚第较小，但细胞散射光特征丢失较肝素标本快；由于相对大量的ACD会通过受更PH而影嘀僧IM组的活性问题,通常不举荐用ACD做"运穿利抗凝剂.(3海本的保存：样本的完整性和细修甜与抗腐剂的选振运崭.保存和阻度体疏相关.志向状否下,样本应在采烫后立即进行处理W染色.砌嘛存(1小时或飒)应磔温(18-220靖时可保存血或管髓标本室源即可，有些样本可鲍4,C为使.标本保存喇间上限取决于标本美编与其保存条件.肝素抗毅的血和骨U通常可保存至4872，J时.EDTA抗凝的血和廿t可保存至12-244时.ACD抗凝的血和骨髓可保存至72小时,但对于只做胞内染色的样本，可簸细胞以长期保存.但?quot;固定-染色的方法取决于要分析的抗原特住和染色方式，采纳之前逸定要图强新标本的比照和沧证明蛤.2-样本制备。弹细脆悬液