T_CSBM 0047-2024 医疗器械表面肝素抗Xall a因子活性和含量试验方法.docx

ICS11.040.01CCSC30T/CSBM团体标准TCSBM00472024医疗器械表面肝素抗Xa/1.1.a因子活性和含量试验方法Testmethodforanti-Xa/1.1.aactivityandcontentofmedica1.devicesurfaceheparin2024-05-14发布中国生物材料学会发布T/CSBM(MM72(I24目次前言II引吉!.!III1蒐围!.!.I2规范性引用文件I3术语和定义I4总则I5试脸方法16报告3参考文献4本文件按照GB，T1.1-20204标准化工作导则笫I部分：标准化文件的结构和起草规则？的规定起草.请注意本文件的某线内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的无任.本文件由中国生物材料学会提出.本文件由中国生物材料学会团体标准化技术委员会归口本文件起草单位：江苏百赛飞生物科技有限公司、百因特表界面检脸检测技术（苏州）有限公司、四川大学、四川医疗器械生物材料和制品检验中心有限公司.山东省医疗器械和药品包装检验研究院、苏州大学、苏州工业园区生物材料表界面工程研究院.本文件主要起草人：李丹、陈益平、梁洁、袁哦、刘成虎、方善庭、陈红。血液接触类器械是指在使用过程中会与人体血液发生出接接触的医疗器械.例如血管通路产品（留置针套管、中心静脉分管等）、体外生命支特产品（血液透析器、腺式氧合器等）、心血管植入产品（心脏支架、人工血管、心脏电膜等）等.血液接触类医疗器械应用面临生物相容性及血液相容性两大问超.与加液接触的医疗器械会激发宿主防御扒制.特别是血液稳定机制,从而级联引起血栓和栓塞的发生.危及患者生命.肝素抗凝效果优良，仅临床应用途径多为部脉注射，但这会导致许多副作用，如引起自发性出血、多器官功能障碍及血小板减少等，且不能达到持续抗凝的目的.因此时血液接触类医疗器帔进行表面肝重涂层改性.提高其侪I液相容性.是解决上述问跑的重要途径.对于肝素抗凝涂层，其表面被通的肝素收，以及涂检到器械表面的肝素药物活性保留，均会影响其功能性的实现.然而，国内带用素抗凝涂层医疗器械的研究和发展刚刚起步,对于医疗器械及面旧素抗XadIa因子活性和含量试验方法的评价研究I分质乏，尚没有适用的检泅标准及监管措施，企业之间缺乏统一和规范的校测评价方法，不利于带肝素涂层器械的偲性发展，因此，建立医疗器械表面肝素抗XaI1.a因子活性和含豉试验方法的检测标准十分必要.疔助于规范和赛科医疗器械涂层巾场的他康挣续发展，最终推动整个医疗器械行业和人类健康产业的高品质发展。TCSB1医疗器械表面肝素抗Xa/1.1.a因子活性和含量试验方法1M本文件规定了指肝素抗凝涂层医疗器械表面肝素抗a因子活性和含量试脸的总则'试验方法和报告。本文件适用于通过一定的方式结合在器娥表面的含有肝素成分的涂层，其他肝素涂层种类亦可参照使用。2震范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该R期对应的版本适用于本文件：不注fI期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改中）适用于本文件。中华人民共和国药典（2020年版四部）（国家药验局国家卫生健康委2020年第78号）3#wm下列术语和定义适用于本文件.3.1JffI满疆heparincoating通过一定方式涂置或结合在器械表面的含有肝素成分的涂层.3.2抗Xa1IIa因子活性anti-Xa1.1.aactivity器械表面的肝素结合抗凝血由川（AT川）抑制XM1.a因子活性的能力，用IU来表示.3.3fF*（MIheparincontent结合在器械表面上的肝索含量，用重量单位表示，UR.4总副结合在械表面上肝素涂层的抗Xa，1I1.a因子活性和含量是发挥其抗凝血功能的巾要影响因索,本文件提供了用于表征带肝素涂层医疗器械表面肝索抗Xa，Ina因子活性和肝素含量的检测方法，其中抗XWI1.a因子活性是基于AT111和肝素所形成的肝素AT1.1.1.H合物抑制Xa/Ha因子活性的能力.肝素含城测试方法有两种，分别为甲苯胺蕊法和WHB法。5试方法5.1 ftXa/1.1.a因子活性肝素与AT411形成复合物，抑制过质添加的XaZI1.Ia因子的活性,发色底物与剩余XaMa因子特异性结合,水解择放对硝基苯胺(pNA).在405nm处的吸光度与反应体系中的肝素浓度成反比，5.1.2 KttM5.1.2.1使用按照£中华人民共和国药典3(2020年版四部)配置.的PH为8.4的三羟甲基氨茶甲烷-聚乙二怫OoO缓冲液配置不同浓度的肝素t内标准溶液，加入抗凝血僚溶液使肝素钠浓度在OIwm1.7IWrn1.范国内，然后加入W11a因子溶液和发色底物溶液,37C孵育2hin20min后，加入酬酸溶液终止反应，立即测量反应液在43所处的吸光度值，以肝素钠浓度的对数值为横坐标，吸光度假为纵坐标绘制标准曲线，采用线性方程进行拟合。5.1.2.2Mtmmc取样M置于试管中，参照5.1.2.1步骤，将样目的吸光度值带入标准曲戏，计鸵得到样船的肝素浓度,5.1.3 结果分析按式。)计兑样品肝素抗XwII1.a因子活性总量(Q):n-OyY2zMawaeaaaMMaa>a>aaa>aJ/式中：Q1样品肝索抗Xaqna因子活性髓量，单位为IU:C样品肝素浓度,单位为IUAn1.:V一缓冲液体枳，单位为血。5.21.1 .1方法一1.2 .1.1.*3肝素在水溶液中由于其酸性基团的解离而高度带负电荷，卬苯股蓝和肝索钠在水溶液中会发生静电结合，未被结合的甲苯胺蓝在最大吸收波长处的吸光度与肝索钠浓使呈规性关系.5.2.1.2MIhMi5.2.1.2.1 标准将肝素钠用生理盐水或PBS缓冲液在OMMn1.30U卬'也莅眼内配置成不同浓度的标准溶液，然后加入甲苯胺监溶液9002%-O.OoO2%wv).室温卜孵育3min10min后测定甲荒胺蓝最大吸收波长处的吸光度值.以肝素浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线,狗日线性方程进行拟合。5.2.1.2.2 M1.frW三1.t取带肝素涂层和无涂层的同种材料样M置于试管中，然后参照5.2.1.2.1步骤，将测试的吸光度值带入标准曲线计算得到样品的肝索浓咬。应进行无涂层的同种材料样品测试,扣除背景材料影响。5.2.2在酸性条件下，利用亚硝酸钠的强氧化性降解涂层中的肝索分子使其会基己树结构脱密并产生解基，然后加入3甲基2笨井嘎呻阴琮(MHTH)与之发生化学反应.最后产生具有蓝色的MBTH鸨联物，反应液最大吸收波长处的吸光度与肝素钠浓度呈线性关系.5. 2.2.2试验步骤6. 2.2.2.1标准曲统制作将肝素钠用生理盐水或PBS援冲液在0Ugm1.-100UgZm1.范用内间比成不同浓度的标准溶液，加入等体积的亚硝酸钠溶液和乙酸溶液37C反应60min以上，然后依次加入等体枳的城基碘酸使溶液、MBTH和氯化铁溶液后，测试在628nm632nm处的吸光J您以肝素浓度为横坐标，吸光度为飒坐标制作标准曲戏，采用我性方程进行拟合。7. 2.2.2.2试验样品测试取带肝素涂层和无涂层的同种材料样品同F试管中，然后参照5.2.2.2.1步骤，将测试的吸光度伯带入标准曲线，计算得到样品的肝素浓度，应进行无涂层的同种材料样从测试，扣除背景材料影响.8. 2.3结果分析按式(2)计算样品表面肝素含浆(Q):Qz=(cco)×v(2)式中：Q-肝索含fit单位为ug:c无涂层样品背景浓度，单位为Ug1.;Ci涂层样品肝素浓度，单位为Mg/m1.：V落剂体积,单位为m1.:注：以重量单位表示肝素含量旨在客观定地描述深层化学组成，并非关联肝痴活性阂性能。6报告试5金报告应包括但不限于以下内容:a)样品的识别：b)样品制符方法；c)测试方法：d)测试条件：e)测试结果。考文献IHurstRE1SettineJM.Anaccurateco1.orimetricmethodformeasurementofSu1.faniinohcxoscinheparinsandheparansu1.fatcsJ.Ana1.ytica1.Biochemistry.1981.115:8892.DOI:IO1.O16XX)3-2697(81)90528-5.