GB_T 44365-2024 牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定 高效液相色谱法.docx
ICS71.100.40CCSY43OB中华人民共和国家标准GBZ1.443652024牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定高效液相色谱法Determinationof6-methy1.coumari,dihydrocounarin,7-nethy1.comarin.7-methoxycoumarin,7-ethoxj'-4-methy1.comarinintoothpastes一Highperformance1.iquidchromatography2025-03-01实施B三三I三发布2024-08-23发布前三I1.1.1范围12规愆性引用文件I3术语和定义I4原理i5试剂和材料16仪器设符27试验步骤27.1 明溶液的制备27.3 标准工作曲线37.4 定373空白Wa38结果计算39回收率4IO精密度4Hft*限和½4附录a（RMtt）标准物项/标准样Ia信息5附录B（资料性）话番豆素标准溶液的色谱图和光谱图6附录C（资料性）确证试舱10C1.色谱参考工作研10C2周工作黯10C.3定性评试11本文件按膜GB"1.1-2020标准化工作导则第1部分I标准化文件的结构和起草规则的规注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的货任。本文件由中国轻工业联合会提出.本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会（SAC/TC492）归口。本文件起草总位：苏州世诺检测技术有限公司、苏州质砥检SI科学研究院、苏科世潜生物技术（苏州）有限公司、苏州市科耐瑞检测技术有限公司、广州舒客实业有限公司、广州质!ft监怦检测研窕院、黑龙江省轻工科学研究院'江西诚志日化有眼公司、无限极（中国）有限公司、柳州两面针股份有限公司、亚庆肾康口腔护理用品股份有限公司、河北竹食M检胎研究院、江苏省产M质房监督检聆研究院、江苏省食品药品监瞥检般研究院、完美（广东）日用品有限公司、清华大学、海南大学、深圳大学、苏州大学、常州大学、常州市食品药品纤维质量监督检验中心、苏州市药品检验检测研究中心、山东华素键康护理品有限公司。本文件主要起草人，叶聚、卢剑、张岩、方方、李建祥、郑卫、叶竹洪、赵、陈敏瑞、*海箫、高艳、杨卫森、陈欣、肖俊芳、秦天依、刘斌、结莉、吴玉鎏、代丹、朱丹丹、王怡、洞!斯、张迎阳、候向JE、宋淑文、聂炎炎、卢曲、要、高龙、原盼、刘群松高红彩、朱M藤、唐文会.I1.1.牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氟基香豆索、7-乙制基-4-甲基香豆素的渊定高效液相色谱法防TM收件的人员应有正提实m作的实健.本文件并未指出所有可健的安全问.使用者考费任采取遁.的安全和康”，并保证符合家旁劫陡的条件.1M本文件描述了牙讦中6-甲基番豆素、二乳存豆素、7-甲基存豆素、7-甲乳基香豆素、7-乙氧基T-甲基香豆素高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪涔设备.试验步骤.结果计算、回收率和精密段:、允许差等内容。本文件适用于牙啬中6-甲域香S泰、二级香口素、7-甲基杏。素、7-甲氧基香豆浆、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定.2捉范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.我中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适刖于本文件：不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改瑕）适用于本文件，GBT6682分析实粉室用水规格和试验方法3 *RUfc5t本文件没有僭要界定的术语和定义.4 Ba牙赧中6-印基杏豆泰、二班香。於、7-甲基香。素、7-甲氧基杏豆素、7-乙辄基-4-甲基杏豆素经甲解提取后，采用而效液相色谱-:极管阵列检测器检测，以保留时间和光谐图定性，外标法定量，55.1 除另有说明，所用试剂均为色谙纯，水为符合GB.T6682要求的一级水。5.2 甲醉.5.3 乙腑.5.1鹿：分析纯，5.5甲酸。5.60.1%（体积分数）磷酸涔液:取Im1.BBM5.4）,加入999m1.水（5.1）,混合均匀.5.720%（体积分数）甲解溶液：准确量取20111甲解（5.2）,加水氏1）至100m1.,混合均匀，6.8标准物质，标准样品；6-甲基香豆素、二氧香豆素、7-卬塞香豆素、7-甲翅祉香.J，,.”乙氧基4甲基香豆索标准物质/标准样品的英文名称、CAS号、分子式、相对分子而Iit和化学结构式见附泉A中表A,1,纯度均不小于98%。5.9标准储备液：分别准确称取各标准物质/标准样品8）10mg（精确至0.00CHg）于IOm1.容量瓶中，用甲醉2）溶解并稀驿至刻度，即得侦后浓度为100Oug/m1.的标准储在液，于2C8C避光保存，可保存6个月.5.10渔膜：孔径O22Um.材质为聚四域乙烯.6仪备高效液相色讷仪：配有二极管阵列检测器.6.26.36.46.56.66.7分析天平：感量0.0OIg和0.00O1.g波涡振荡器.超声波清洗仪：工作频率不低于加kHz.7.1试样溶液的制备7试聆步喔离心机：最高转速不低于100oormin,氮吹浓缩仪，格液管或移液器：1位甲醉（5.2）,具塞后涡旋混合混匀，超声15min涂U1.（XXX）离心。取Iom:I.展清液于球璃试管中，45CWJ吹至干，加入Om1.20%电酹溶液C）复器经22m膜过滤后的高数液相色谱似测定.7.2需定斯效液相色谙测定参考条件如下:a）色谱柱规格：HSST3色谐柱，1.Hn5）mm×2.1.mm,或性能相当者：b）流动相:乙肝（5.3）和0.1%磷酸溶液，梯度洗脱条件见表I：c）流速：0.3mbmin:d）柱温：30:O波长：二氧香豆素检测波长225nm6甲基香豆索、7甲基管豆素、7甲钝基香豆素和7-乙制驻F-甲堪香豆素检测波长32On0进样吊：10MU«1旋动相梯度洗脱条件时间11dn6M¼0.%wwifiifty%0IOJW52080203070258020BOKO20表1流动相梯度洗脱条件(域)时向Iin乙IWN0.八例酸溶液/*3110903510907.3标准工作曲线混合标准中间液：分别移取各标准储备溶液(5.9)0.50m1.于Iom1.容量瓶中,用甲醉(5.2)桶择至刻度,混匀.得到质Ift浓度均为50咚4的混合标准储得液.标准工作溶液：用20%印醉溶液(5.7)逐级稀择混合标准中间液，得到质量浓度均为O.IOgm1.0.20XgJm1.、0.50g'm1.,1.0gm1.2.0g4n1.,5.0pg/m1.、10.0gm1.标准工作溶液，按色谱条件(7.2)对标准工作溶液进行测定，以色谱蚱的峥面积为纵坐标、与其对应的溶液浓度为横坐标作图，姥匍幅准工作曲线，6-甲基杏豆素、二氯杏豆素、7-甲基杏豆泰、7-甲氟基杏泰、7-乙氧荔7-甲基杏豆泰标准物旗/标准样品溶液的高效液相色谱图见附录B中图B1.,紫外吸收光谱图见图B.2'R1.B.6.7.4 试样测定按色谱条件测定试样溶液(7.1),如果检出目标物质的色谱峰的保留时间与标准物质/标准样品一j¾,此紫外吸收光谱图与标准物质/标准样品一致，可认定样品中存在目标物质，记录色诺峰的峥面枳,以外标法定度。试样溶液中被测物的响应值均应在标准曲线的妙性范曲之内，超出线性范国的试样溶液可用20%甲醉溶液(5.7)适当稀择后进行测定.需要时,可采用高效液相色谱串联质谱法进行确证试验，见附录C.7.5 空白试验除不检取试样外，均按7.1.7.2步骤迸行测定，8结果计算试样中目标物含量按公式(D计算，(5)×v×100oxam×1.OOO式中：X；试样中目标物的含量，单位为毫克每千克(mg,，kg);Pi-ft标淮他蟹倒的试檎楸中目标物的质量浓单位为微克每戛升(ugO;Po从标准曲段得到的空白样品溶液中目标物的质量浓度，单位为微克旬毫升(ug'm1.)；V一加入甲第:溶液的体积，单位为公开(三1.);1000换算系数：m成样的侦破，单位为充值)：k超线性范用的输择倍数.计算结果以两次平彳定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。GB44365-2(1249回收率在添加浓度为1.OmMg1.mg&g范时内，回收率在801.10%之间。10 M度在重发性条件下获得的两次独立测定结果的绝对是俏不应超过算术平均值的10%。11 MPUDJtM按本文件规定条件下，6-甲基杏豆索、二氮香豆索、7-甲基香豆素、7-甲氧基杏豆索、7-乙氧基-4-甲基杏U素的检出限均为03mgk1定量限均为1.0ng,'kg.M量A(XWtt)6甲基杏豆素、二氧香豆素、7-甲基存豆素、7-甲氧班香豆素、7-乙氧基T-甲基香豆素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相时分了侦破及化学结构式见表A1.»A.15利看豆素标准徨质淅准样品值总字号中文名称英文名称CAS号分r式相对分f出量化学簿构式16-甲球G豆案(j-Vethyk<uter1.n9278-8CJ1.A160.17JCXT2二氯宙立案IH1.iyditMXfuver1.nIM84-6Cg14a16OT31甲翦舍0索I-Vcthy1.couKirin2445-83-2CdIA160.176<7-Kft11*7Ncthoiycouuirin6：H-除9I76!7XerO57-乙机某7-甲基件Q家7Etboxy1Dothy1.counirinR?-05-«21>I.ZJro5MM丽液的色谱图和光啦6甲基香豆素、二M香豆*7甲基香豆素、7¥短结豆素、乙短"甲基香豆素标准港浦谢高效液相色谱图见图B.1,光谱图见图B,2图B.6。035；55<>505O322IIo(>o.o.o.so,O.0.002.(XM.006.(XB.(X)I().0012.0014.0016.001S.20.622,)24.(X>26.()028.)30.32.0034.()01.Yni>)WKHfcAZKia0.5010.40.0.300.20jo,°ko.mI1.P1.o'(i(ii('XkdA而8：(由'(诵)日及HajkKd(订8.«诩加.旗旗：(顺面汉()(汉).6比1炽400Uninb)MUt*A320»标引序号说明：I二氯否豆素：27-*SjK.3&甲基，豆%4-7-*三*1.6-7-乙IuJ"甲”豆索.SB.15»Hmj幅海酰的高效液相色谱图三B37.甲M豆索标海桐的光图bb.46-甲三B57-甲再番豆素标准溶液的光聊B（；B?
