GB-T 44365-2024牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定 高效液相色谱法.docx

ICS71.100.40CCSY'43(三中华人民共和家标准GB/T443652024牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定高效液相色谱法Determinationof6-methy1.coumarin,dihydr(oumarin,7methyIcoumarin,7-ncthoxycounarin,7-cthoxy-4-mcthy1.coumarinintoothpastesHighperformance1.iquidchromatography2025-03-01实修国家市场监督管理总局总«国家标准化管理委员会发布前古1范围2规范性引用文件3术语和定义4原理5试剂和材料6仪滞设备27试验步骤27.1 试样溶液的制得27.2 测定27.3 标准工作曲线37.4 试样测定37.5 空白试监38结果计算39I可收率410精诙度4I1.检测网和定房限4附录A（资料性）标准物质/标准样M信息5冏录B（资料性）5种香豆素标准溶液的色谱图和光谙图6附录C（资料性）储证试验IOC.1液相色谱参考工作条件10C.2质诺参考工作条件IOC.3定性测试I1.本文件按照GB,T1.1-2020标准化I：作导则第1郃分：标准化文件的结构和起电设则3的规定起草请注意本文件的某些内容可能涉及（；利.本文件的发布机构不承担识别5利的揖任。本文件由中国轻工业联合会提出.木文件由全国口医护理用品标准化技术委员会（SAeTC4%）y.本文件起草单位：苏州世诺检测技术有限公司、苏州版Ift检测科学研究院、苏科世诺生物技术（苏州）有限公司、苏州市科耐瑞检测技术行限公司、广州舒客实业宥限公司、广州质量监Pf检测研究院、黑龙江省轻I：科学研究院、江西诚忐日化有限公司、无跟极（中国）仃限公司、柳州两面针股份有限公司、Ift庆登康U腔护理用品股份有限公司、河北省食品检的研究院、江苏省产品质m监督检验研究院、江苏有食品药品监督检验研究院、完美（广东）日用品有限公司、清华大学、海南大学、深圳大学苏州大学、常州大学、常州市食品药品纤领:旗信监讨校验中心、苏州市药品检验检测研究中心、山东华素健康护理品有限公司。本文件主要起草人：叶嘉荣、卢剑、张岩、方方、李建祥、郑卫.叶竹洪、赵娟嫌、除收琥i午海燕、高艳.杨卫登、陈狄、肖俊芳、秦天依、刘斌、结莉、吴玉鎏、代丹、朱丹丹、王怡'李珊斯、张迎阳、侯向袒、宋淑文、/炎炎.卢应红、美雷、高龙、顺盼、刘群林、高红影、朱比较、国文金。牙弄中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲融基香豆素、7-乙融基Y-甲基香豆素的测定高效液相色谱法的本文件的人员应制日娱工作的实IMsi1.本文件林指出所MnK的安全包.使用看松任采取道制的安全和财修,并酶符合m关廉定的条件.1»9本文件描述了牙膏中6甲基香豆素、二氢香豆素、7甲基香豆索.7甲钏基香豆素、7乙一基7甲葩杏豆索高效液相色滑测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步界、结果计算、回收率和耕密度、允许差等内容.本文件适用于牙膏中6-甲基香豆素、二氧杏豆素、7-甲基香豆素、7-甲乳基存豆素、7-乙鼠基T-甲基香豆索的测定.2祝范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成木文件必不可少的条款。其中，注11期的引用文件，仅该口期对应的版本适用于本文件：不注口期的引用文件，其以新版本（包括所有的修改单透刖于本文件。GBT6682分折实脸室用水规格和试脸方法3本文件没有需要界定的术语和定义.牙膏中&卬册杏豆素、二发香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧暴布豆素、7-乙氧艇F-卬茶香豆素经甲解提取后，采用制效液相色谙-：极苦阵列拉於器检测，以保留时间和光谱图定性，外标法定址，55.1 除另有说明,所用试剂均为色谱纯，水为符介GB，T6682要求的一级水，5.2 卬醇.5.3 乙腊。5.4 陵酸；分析纯.5.5 甲俄。5.6 0.1%（体积分数）策酸溶液：取Im1.瞬酸（5.4）,加入999m1.水（5.1）,混合均匀.5.7 20%（体积分数）甲醉溶液：准确fi1.取20m1.甲醉（5.2）,加水（5.D至100m1.,混合均匀.5.8 M准物质/标准样品：6-甲基番豆素'二氧香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基否Y.、7-乙班基T-甲基乔豆素标准物质/标准样品的英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和化学结构式见附录A中表A.I.纯度均不小于98%.5.9 标准储备液：分别准确称取各标准物质/标准样品（5.8）1Omg（精确至0.0001g）干IeIm1.容盘瓶中,用甲肝（5.2）溶斛并稀择至刻度,即树质量浓度为100OP以m1.的标准储备液.于2C'8C避光保存,可保存6个月.5.10 沌腴：孔径0.22um.材质为聚四斌乙烯.6仅g&1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器.62分析天平：感后0OO1.g和0.0001&6.3 战湖振荡器。6.4 超声波清洗仪:作城率不低于40kHz.6.5 离心机：以高转速不低于IOC100rmint6.6 额吹浓缩仪.6.7 移液管或移液器：Im1.,10m1.7.1 I*称取Ig（精确至0.0CHg）试样,置于50m1.具塞肉心管中,准确加入IOm1.甲醉（5.2）,具塞后涡旋混合混匀,超声15min.冷却后100OOrmin离心5min.取1.0m1.上层清液干玻璃i罐蔚45匕纵吹至干，加入1.0m1.20%甲醇溶液7）更溶.经0.22Um注膜过谑后待高效液相色谱仪测定.7.2 制定高效液相色谱测定参考条件如下：a）色谱柱规格：HSS13色谱柱,1.8Um.ISOmmx1.1.mm或性能相当齐：b）流动相；乙脑3）和0.1%磷酸溶液，梯度洗脱条件见表I；O流速：0.3Iii1.Zmin:d）柱温：30C;e）波长：二笈吞豆素检测波长225nm6甲地杏豆素、7-甲基杏豆素、7-卬氧茶吞豆素和7-乙敏施7-甲聪布豆素检测波长320nn0进样量：10U1.«1拉动相梯度洗脱*件时同in乙0.愿除酸溶液N0109052080203070258020308020表1流动相梯度洗脱条件(续)时间/iIin乙IW八D.N磷酸溶液，¥3110903510907.3标准工作曲线混合标准中科中:分别移取各标准储备溶液(5.9)050rn1.F10m1.容量瓶中，用甲醉(5.2)移拜至刻度.混匀.得到质址浓度均为50m1.的混合标准谛备液.标准工作溶液：用20%甲也:溶液(5.7)逐级稀择混合标准中间液，得到质W:浓度均为0.10BgZm1.、0.20g111.0.50g,m1.>1.0g,m1.>2.0gfn1.%5.0gm1.%10.0gm1.标港工作溶液。按色洒条件(72)对标准工作溶液进行测定,以色渺峰的峰而枳为纵坐标、与其对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲战。6-甲基香口素、二氮香。微、7-甲基杏。素、7-印氧基再口素、7-乙氧基-4-甲基杏豆素标准物质/标准样品溶液的高效液相色谓图见附录B中图B1.紫外吸收光诺图见图B2图B.6。7.4 试样测定按色谱条件测定试样溶液(7.D,如果检出目标物质的色谱峥的保用时间与标准物质/标准样品一致,且紫外吸收光谱图与标准物质/标准样品一致，可认定样品中存在目标物质，记录色诣峰的峰面积,以外标法定试样溶液中被测初的响应值均应在标准曲战的线性范国之内，超出线性范围的试样溶液可用20%即醉溶液力适当稀择后进行测定，需要时，可采用高效液和色游小联质谐法进行确证试脸,见附录C.7.5 空日试的除不称取试样外，均按7.1.7.2步骤进行测定.8结果计算试样中目标物含贵按公式(D计算:Xi=(A-Pu)XVxIOCOn×1.000X式中:X；试样中目标物的含血单位为富克H克(mg);Pi从标准曲线知到的试样溶液中目标物的质后浓度，单位为微克每票开(311O:Po-从标准曲戏得到的空白样品溶液中目标物的顺采浓度，单位为微克姆富升(ugn1.);V加入甲醉溶液的体枳，单位为/升(m1.X100O换算系数：m成样的桢设，单位为克(g);k超线性范围的稀择倍数.计算结果以两次平行测定结果的算术平均俄表示,保留三位有效数字.9回收率在添加浓度为1.0mgkg-IOmg/kg范围内，回收率在80110%之间.10Mft在更笑性条件下扶褥的两次独立测定结果的绝时差值不应超过算术平均值的10%.11检MPK和定限按本文件规定条件下，6-印基香豆素、二级香豆素、7-甲基杏豆素、7-甲辄基香豆素、7-乙氧基-4-卬册杏豆索的检出限均为03ng.'kg,定质限均MQmg1.g,M*A(IWWt)*MzWam6-甲基香豆素、二氢杏豆素、7-甲基香豆素、7-甲氯基香豆素、7-乙氧基T-甲基香豆素的中文名称、英文名称、CAS号、分了式、和时分了侦破及化学结构式见表Ax*5WSK*MR«)MMMKJa疗弓中文名称荚文名移CAS9分f式相对分子晚量化学站为大I6甲苑香改累6Vcthy1.ooumrin92-1R-H160.17XXro2二乳存0素Dihydrocouuirin119816、山卜14a1637中基哲0京I-Vcthy1.couwirin2445-83-2160.1747-H1.M*ftS1.<7Mctho<uu>rin531-59-9CW1然17Xa57-6K-4-U11M7Etboxy4Rothy1.coururinS7YI5-821>I.2Jixrt刑最B渐豆素标准潮雌色谱SB*冼道图6川基香豆素、二乳香豆素、7-甲基香豆素、7-甲乳基香豆素、7乙氯基7甲基香豆素标准溶液的高效液相色谱图见图B.1.光谱图见图B2图B.6,a)检测波长为225rs05010.40u0.3002°)j0,0teOXX)!.八巴1._0.00200».006>008001000120014001600181)02000210024.0>260023.期0(0032.003400Itinnb)检XM长为320m.标引序号说明II二ya«.27-甲班盛鲁立索：3-6-甲压杏豆素；，1-7-甲某杏豆素：57-乙领MT-甲M杏豆素.B.1.5MffBSWVWAKKttiMfittB国W神翱“身R”由4HB聚ME,rzozS9frrin)BIB.46-甲片青豆和网*液的光谱8920.然SWR的BB.57-甲“豆制网«液的光谱图GBTT443