自动化分析(免疫比浊).ppt

临床免疫学检验临床免疫学检验免疫检验自动化分析仪免疫检验自动化分析仪 如免疫球蛋白如免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM 、 ；补体；补体C3C3、C4C4；血浆蛋白血浆蛋白AATAAT、TRFTRF、A1MA1M、CERCER、HPTHPT、PABPAB、ALBALB；炎性反应蛋白炎性反应蛋白 SAASAA、CRPCRP；载脂蛋白载脂蛋白 APOAPO、ABIABI；尿蛋白系列尿蛋白系列小分子治疗药物小分子治疗药物检检范范围围测测血浆、体液中特种蛋白血浆、体液中特种蛋白概括：概括：免疫比浊测定原理，以及影响免疫免疫比浊测定原理，以及影响免疫比浊的因素。比浊的因素。 原理：原理：免疫当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例免疫当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。器对浊度进行测定从而检测抗原含量。影响因素：影响因素：抗原抗体的比例，反应体系中保持抗体过量；抗原抗体的比例，反应体系中保持抗体过量； 抗体的质量，要选择特异性强、效价高、亲和抗体的质量，要选择特异性强、效价高、亲和 力强的多抗；力强的多抗； 抗原抗体反应的溶液，合适的抗原抗体反应的溶液，合适的PHPH（6.56.58.58.5） 和离子强度；和离子强度； 使用增浊剂可增强检测信号。使用增浊剂可增强检测信号。免疫比浊分析技术发展免疫比浊分析技术发展两两个个阶阶段段免免疫疫比比浊浊法法分分类类一、散射免疫比浊分析原理一、散射免疫比浊分析原理散射比浊法：散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或折射，发生偏转.散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。（一）基本原理（一）基本原理 1.1.是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反在抗原抗体反 应几秒钟后开始测定峰值信号应几秒钟后开始测定峰值信号”。 2.2.目的是排除抗原抗体反应的目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差不稳定性，降低检测误差。时间时间检测分两个检测分两个在预反应时段，在预反应时段，加小量样本与加小量样本与抗体反应，抗体反应，测定第一次散测定第一次散射光信号值射光信号值加全量样本，加全量样本，约反应约反应 2 2分分钟后，第二钟后，第二次测定散射次测定散射光信号光信号信号峰值信号峰值计算机处理计算机处理转换为样转换为样品浓度品浓度（二）（二）抗原过量检测抗原过量检测抗体过量抗体过量 在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的血清的5050倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。抗体的结合。对抗原过量进行阈值限定对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原先测定预反应时段抗原- -抗体复合物的散射光信抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。采用两项保证措施：采用两项保证措施： （一）基本原理（一）基本原理 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 所谓速率，是在所谓速率，是在单位时间内单位时间内抗原抗体结合形成抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。的速率比浊分析。 当仪器测定到某一时当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时，间内形成速率下降时， 即出现即出现速率峰速率峰，该峰，该峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所 测抗原的量。测抗原的量。（一）基本原理（一）基本原理当光源的光路（角度与正前方夹角为当光源的光路（角度与正前方夹角为0 00 0时），通时），通过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。检测器检测器检测器检测器光源光源 透镜透镜 滤光片滤光片平光线平光线散散射射光光透射光透射光 散射比浊、透射比浊光路图散射比浊、透射比浊光路图 实验要求（了解）实验要求（了解）v 溶液中形成的复合物分子应足够大溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm)(35-100nm)v 溶液中形成的复合物分子要足够多溶液中形成的复合物分子要足够多v 控制抗原抗体反应的温度和时间控制抗原抗体反应的温度和时间v 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间v 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量v 将标准品稀释至少将标准品稀释至少5 5个浓度测定，以吸光度值个浓度测定，以吸光度值(A)(A) 为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标 准曲线，准曲线，