DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析.docx
表明，该位点的转换可以使DMT3B启动子的活性憎加30%90食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在发展中国家居第5位，我国的食管癌死亡率居世界首位10。早期食管癌经手术切除后5年生存率可达90%以上，而中晚期患者仅为6%15%1112。假如能够做到早期诊断或易感风险评估，则有可能降低食管癌的死亡率。本探讨选择江苏地区汉族人群，探讨DNMT3B基因C46359T位点基因多态性与该地区人群食管癌遗传易感性之间的关联。1材料和方法1.1材料病例组选自2007年2月2007年7月在江苏省肿瘤医院、南京军区南京总医院保存的食管癌病人血液样本195例，其中男153例，女42例，全部病例临床资料完整。血液标本采集前均未有抗肿瘤药物运用记录。比照组为健康人血液样本189例，其中性别、年龄等均与病例组相匹配，男135例，女54例，见表E两组人群均系江苏地区汉族人群，个体之间均无血缘关系。1. 2方法1.2.1基因组DNA抽提采集静脉全血2ml,乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)抗凝，常规蛋白的K消化后苯酚/氯仿抽提，乙爵沉淀法提取基因组DNA6,总共提取食管癌患者、健康正常人外周血DNA384例，提取的DNA溶解于pH8.OTE中，4C保存。380bp的片段，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果见图U经限制性内切酶BinI酶切后，当nt46359处为T时，BinI可将PCR产物切为207bp和173bp两个片段；当nt46359处为C时，BinI不能将PCR产物切开，只有1个380bp的片段：当nt46359处为CT时，为380bp、207bp和173bp3个片段，见图2。为证明酣切结果，将凝胶电泳证明为CT基因型、TT基因型各2例PCR产物送至测序公司(南京金思特公司)进行测序，其中的头所示为DNMT3B启动子C46359T多态性位点，见图3。2. 3DNMT3BC46359T等位基因频率在病例组和比照组中的分布经HardyWeinberg遗传平衡吻合度检验，病例和比照组的基因型分俏符合遗传平衡定律。结果显示，正常比照中DNMT3BC46359T等位基因TT/CT基因型频率为98.9%1.1%,T的频率为99.47%,C的频率为0.53%；病例组中TT/CT基因型频率为97.9%2.1%,T频率为98.97%,C的频率为1.03%经2检验，DMrr3BC46359T等位基因TT/CT基因型频率在正常人群和食管癌患者中分布差异没有显著性(P=O.43),比照组与病例组中均未检测到DNMT3B46359CC基因型。见表2。注：括弧中为所占百分比2.4DNMT3BC46359T等位基因频率在中国汉族人和英国、美国白种人中的分布经与文献报道的DNMT3BC46359T等位基因频率分别在英国和美国白种人9,14之间比较，显示英国、美国白种人中TT、CT和CC基因型分别占23.2%45.0%31.8%和23.2%41.8%35%,而中国汉族人TT和CT基因型分别为98.9%和1.1%,中国汉族人DNMT3BC46359T等位基因频率分布与英、美两国白种人存在显著的统计学差异(PIt;0.01),见表3。3探讨单核昔酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP)主要是指在基因组水平上由单个核甘酸的变异引起的DNA序列多态性，在人群中的频率大于1%,是人类可遗传变异中最常见的一种，占全部已知多态性的90%以上15。SNP与肿瘤等很多疾病的易感性有关16。探讨表明，位于基因启动子区的SNP能影响基因的表达或的的活性1314»DNA甲基化在胚胎发育和印迹基因的转录抑制，如X染色体的失活以及很多人类肿瘤中重要基因的异样缄默中起重要作用17。DNMT3B基因启动子区749位C46359T多态性与乳腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌以及急性白血病等多种肿瘤易感性有关9,14,1820。这些探讨提示该位点的遗传变异可能与多种肿瘤发病风险相关，该位点可能作为评价人群肿瘤易感性的一个指标。到目前为止，C46359T是否与食管癌易感性有关尚不清晰。表3DNMT3B基因启动子区C46359T等位基因频率注：括弧中为所占百分比食管癌是我国常见的一种消化道肿瘤，因其缺乏有效的早期诊断指标，当患者出现症状时往往为中晚期，不利于治疗，且预后不良。为了给食管癌供应一个早期诊断指标，我们对DWT3B基因启动子区上游149位C46359T多态性与食管癌的易感性进行了探讨。本探讨所得DNMT3B基因启动子区749位点基因型分布结果符合HardyWeinberg平衡定律。正常比照组中TT基因型为98.9%,CT基因型为1.1%,病例组中分别为97.9%和2.1%,两者无显著的统计学差异(P=043,OR=1.96,95%CI为0.35-10.82)。这说明至少在我们的探讨中，DMT3B基因启动子区上游149位C46359T多态性与食管癌易感性之间可能无显著的相关性。这有可能必由于在不同的细胞组织中DNMT3B的不同剪切子催化活性有差异8,或者是DNMT3B活性的抑制不能使一些细胞系中高甲基化的肿瘤抑制基因激活2122,而且在不同肿瘤中，C和T所代表的风险因素也不同，如在肺癌中，DNMT3BC46359T的CT÷11基因型所患风险几乎是CC基因型的两倍20：而在乳腺癌中，CT÷CC基因型风险率显著高于TT基因型9,这说明在不同的肿瘤中DNMTs作用的困难性。本探讨结果还显示中国汉族人的基因型分布与英国、美国白种人有显著不同(Pit;0.01)o有关中国人群该位点的探讨结果发觉，此CT基因型在中国汉族为2.5%16,北方地区为5.1%19,正常比照组中均未检出CC基因型，这种分布的显著差异的机制还没有明确。DNMT3B多态性的生物学功能，以及其在肿瘤发生过程中的作用还有待进一步探讨。此位点与食管癌易感性的相关性还须要在其他种族中进行探讨。【参考文献】口吕宝忠，赵寿元.肿瘤遗传学M.北京：科学出版社，1998：98.2WEBERB1.,nathnsonkl.1.owpenetrancegenesassociatcdwithincreasedriskforbrcastcancerj.EurJCancer,2000,36(10):11931199.3PONDERBA.CancergeneticsJ.Nature,2001,411(6835):336341.4ENGC,HERMNJG,BY1.INSB.AbirdseyeviewofglobalmethylationJ.NatGetet,2000,24(2):101102.5ROBERTSONKD,KEYOMARS1K,GONZ1.ESF,etal.DifferentialmRNAexpressionofthehumanDNAmethyltransferase(DNMTS)1,3aand3bduringtheG0GItoSphasetransitioninnormaIandtuiiiorce11sJ.NucleicAcidsRcs,2000,28(10):21082113.6MIZUNOS,CHIJIWT,OKMURT,etal.3,ExpressiOnofDNAmethyltransferasesDNMT1,and3Binnorma1hematopoiesisandinacuteandchronicmye1ogenous1eukemiaJ.Blood,2001,97(5):11721179.7 1.IUK,WANGYF.EndogenousassaysofDNAmethyltransferases:evidencefordifferentialactivitiesofDNMT1,DNMT2,andDNMT3inmamma1iance11sinvivoJ.MolCellBiol,2003,23(8):27092719.8OKANOM,BE1.1.DW,HABERDA,etal.DNAmethy11ransferasesDnmt3aanclDnmt3bareessentia1fordenovomethyIationandma11maliandeveIopmentJ.Cell,1999,99(3):247257.9Montgomerykg,liumc,ecclesdm,etai.heDNMT3BCTproniolerpolymorphismandriSkofbrcastcancerinaBritishpopulation：aeasecontrolstudyJ.BreastCancerRes,2004,6(4)：390394.10饶克勤，李连弟.中国恶性肿瘤危急因素探讨M.北京：中国协和医科高校出版社，2003:235248.11WANG1.D.ZHENGS.ZHENGZY,etal.PrimaryadenocarcinomasofloweresophagusjesophagogastricJunctionandgastriccardia:1 nspecia1referencetoChinaJ.WorIdJGastroentero1»2003,9(6)：11561164.12MORETOM.DiagnosiSofesophagogastrictumorsEJ.Endoscopy,2003,35(1)：36.13SKOOGT,vantH00FTFM,K1.1.INB,etal.Acommonfunctiona1po1ymorphism(CAsubstiIutionatposition863)inthepromoterregionofthetumournecrosIsfactoralpha(TNFalpha)gcncassociatedwithreducedcirculatinglevelsofTNFalphaj.IIumMolGenet,19998(8)：14431449.14SHENH,WANG1.,SPITZMR,etal.nove1po1ymorphiSminhumancytosineDNmethyItransferaseSBpromoterisassociatedwiIhanincreasedriSkoflungcancerJ.CancerRes,2002,62(17):49924995.15CO1.1.INSFS,Brooksld,CHAKRVRTI.ADNApolymorphismdiscoveryresourceforresearchOnhumangeneticvariationJ.GenomeRes,1998,8(12)：12291231.16CO1.1.INS,1.ONJOUC,MORTONNE,eta.GeneticepidemiologyofsinglenucIeotidepo1ymorphismsJ.ProcNatlAcadSciUSA,1999,96(26)：1517315177.17JONESPA,TAKAID.Thero1eofDNmethyIationinmamma1ianepigeneticsj.Science,2001,293:10681070.18李渊，戴悦，武淑兰，等.DNMT3B基因启动子单核甘酸多态性C46359T与急性白血病的关系J
