2.团体标准《六堡茶中花青素的测定 高效液相色谱法 三重四极杆液质联用法》编制说明.docx

团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（征求意见稿）编制说明一、项目来源根据广西标准化协会关于下达2023年第四十五批团体标准制修订项目计划的通知（桂标协（2023）157号）文件精神，由梧州市食品药品检验所提出，广西格州圣源茶业有限公司、广西梧州芙叶茶叶股份有限公司、梧州市天誉茶业有限公司、广西速溶六堡茶工程技术研究中心共同起草的团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（项目编号：2023-4503）0二、项目背景及目的意义（一）背景为贯彻落实习近平总书记重要指示精神，广西壮族自治区人民政府提出促进广西茶产业高质量发展的战略部署，经自治区政府同意，自治区农业农村厅印发了加快推进广西六堡茶及特色优势茶产业高质量发展实施方案，明确把梧州六堡茶作为核心重点打造，力争到2025年，综合产值突破100O亿元，其中梧州六堡茶综合产值达至U550亿元。2021年12月，梧州市相继出台了梧州市六堡茶文化保护条例梧州六堡茶产业高质量发展三年行动计划（2021-2023年）梧州市支持六堡茶茶园建设政策等政策法规，为六堡茶产业高质量发展提供政策保障，对六堡茶全产业链的各个环节均给予政策、资金支持。梧州市第十四次党代会及“两会”均专门提出要大力发展六堡茶产业，实施六堡茶产业发展行动计划，从茶苗、茶园、茶企、茶师、茶市、茶城六大关键环节着手，系统推进六堡茶产业做大做强，实现六堡茶销全国、卖全球。决心要把梧州六堡茶产业打造成为广西茶产业的“半壁江山”。（一）目的意义花青素是广泛存在于植物中的水溶性天然色素，在植物细胞液泡不同的PH值条件下,花青素使植物呈现五彩缤纷的颜色。已知天然存在的花色素有250多种,存在于27个科、73个属的植物中，常见的花青素有6种,即飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药色素和锦葵色素。花青素主要以花色音的形式存在，通过形成塘音键的方式与1个或多个葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等结合，因此花青素具有较强的抗氧化性，可以增强体内免疫系统功能，使机体耐受力增强，减少体内维生素A氧化，促进视网膜细胞中的视紫质再生，起到保护视力的作用，可以漕加血管弹性从而防止血管硬化保护血管。随着人们自我保健的意识日益增强，绿色健康的保健方式更能得到人们的青睐，因而富含花青素食品市场发展的潜力非常大。通过对六堡茶中花青素含量的测定，为企业提供不同产品的花青素含重数据，对于企业研究开发富含花青素六堡茶产品提供技术支撑，推动六堡茶产业实现由“加工驱动发展''模式转变为“科技驱动发展”的新模式。（三）必要性目前茶叶中花青素的测定方法在检验标准和论文研究中主要有四种:1.高效液相色谱法：HP1.C是一种常用且可靠的分析技术，通过不同组分在色谱柱中的相互作用和分离来测定花青素的含量；2.分光光度法：分光光度法是一种简单、快速的测定方法，适用于花青素的初步测定，通过花青素在最大吸收波长下的吸光度来测定花青素的含量；3.质谱法:通过高效液相色谱-质谱联用法(HP1.C-DAD-MS),测定茶叶中花青素的含量具有高灵敏度高选择性的特点；4.pH示差法:PH示差法是在花青素最大吸收波长下确定两个对花青素吸光度差别最大但是对花青素稳定的PH值，对花青素进行定量分析。花青素是植物体内较为重要的一类次生代谢物，广泛分布于表皮细胞的液泡中。六堡茶中的花青素含量会受原料中花青素的分布情况、六堡茶制作工艺、后发酵储存情况等影响，存在较大的差异。农业部制定的农业行业推荐标准NY/T2640-2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法中花青素的提取水解方法，对于提取含量较低的六堡茶中花青素，缺乏考虑其本身的其他色素干扰，会影响花青素的含量测定的准确性。制定六堡茶中花青素的检脸方法标准，能针对该类基质制定针对性的净化方法，对更好的研究六堡茶中花青素含量及其生物利用率提供检验技术支撑。生产企业通过了解六堡茶中花青素含量水平，可以研究如何改进工艺以更好利用花青素，生产出富含花青素的产品，增强六堡茶产品的市场竞争力，推动六堡茶产业的高质量发展。三、项目编制过程(一)成立标准箱制工作姐团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法项目任务下达后，梧州市食品药品检验所等单位成立了标准编制工作组，起草单位制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由梧州市食品药品检验所、广西梧州圣源茶业有限公司、广西梧州芙叶茶叶股份有限公司、梧州市天誉茶业有限公司、广西速溶六堡茶工程技术研究中心等起草单位组成标准编制工作组，编制工作组下设三个组，分别是资料收集组、草案编写组、标准实施组。资料收集组负责国内外有关六堡茶中花青素的测定，高效液相色谙法和三重四极杆液质联用法的文献资料的查询、收集和整理工作，查阅前人对六堡茶中花青素的测定，高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法研究情况和进展。草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。标准实施组负责六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法团体标准发布后，组织科研院所、相关企业开展标准宣贯培训会，对标准进行详细解读，让相关人员了解标准，并根据标准对六堡茶中花青素的测定进行规范化操作，保证方法的准确性，并对标准实施情况进行总结分析，不断对团体标准提出修正意见。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关花青素检测相关文献资料。主要有：NY/T2640-2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谙法DBS63/0011-2021食品安全地方标准黑果枸杞中花青素含量的测定DB64/T1578-2018黑果枸杞中花青素含量的测定高效液相色谱法DB22/T2529-2016紫穗玉米花青素测定分光光度法T/QAS075-2022黑果枸杞及其制品中花青素（花色甘）的含量测定PH示差法T/NAIA0147-2022翻萄酒中6种花青素的测定液相色槽-质谱/质造法T/JTAIT11-2022鲜蓝莓中花青素的测定液相色谱串联质漕法（三）研讨磷定标港主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、分析步骤、结果计算与表示、质量控制。（W）形成草案、征求意见稿2023年1月11月标准编制组经过大量文献调研和基础实验，建立了六堡茶中花青素测定的高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法，2024年1月，组织了三家有资质的实验室进行方法验证，于2024年2月收回了全部的险证报告，在此基础上进行了数据的汇总和分析整理工作。2023年11月2024年2月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有参考资料中有关检测方法，并结合前期实验的实验结果，按照简化、统一等原则编制完成团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谙法/三重四极杆液质联用法（草案）。2024年2月2024年4月，标准编制工作组对前期的研究和数据进了整理并结合前期技术咨询会、征求意见会、技术审查会的内容针对该检测方法多次讨论、研究，最终形成团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法（征求意见稿）和编制说明。四、标准制定原则1,实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，分析花青素的检测方法如：分光光度法、PH示差法、高效液相色谱（HP1.C）法、液相色谙-串联质谱法（1.eMS/MS）等，优化六堡茶中花青素的检测方法，在现有国家、行业标准相关花青素的检测方法的基础上，结合六堡茶基质的基质特点和提取方法起草的。符合当前六堡茶质量检测的要求，填补测定六堡茶中花青素方法标准的空白，有利于行业的长远发展，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了高效液相色谱法和三重四极杆液质联用法测定六堡茶中花青素的技术要求与相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB"1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4,前瞪性原则本文件以的当前花青素检测方法为基础，通过高效液相色谙法和三重四极杆液质联用法测定六堡茶中6种花青素，为六堡茶中花青素检测提供检脸方法，在标准中体现了特色性、前瞻性和先进性，符合提升六堡茶品牌价值的要求，由此衍生的六堡茶新型产品更能成为六堡茶的一项特色增强其品牌市场竞争力。五、标准主要内容及依据来源团体标准六堡茶中花青素的测定高效液相色谱法/三重四极杆液质联用法主要章节内容为原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、实验步骤、结果计算、精密度、检出限和定量限。(一)原理六堡茶中花青素主要以花色昔的形式存在。试样经乙醉-水-盐酸溶液超声提取花色素甘后，经沸水浴将花色素苗水解成花青素，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量；用液相色谱-三重四极杆质谱仪测定，以保留时间和特征离子峰定性，外标法定量。(二)试剂和材料本标准研究的目标化合物的基本信息如下表1。实验用水为超纯水。试剂为符合国家标准的液相色谱纯化学试剂，在使用前均进行试剂空白实验，满足方法要求才可使用。标准物质等均为购置市售有证标准品O表1目标化合物基本信息化合物英文名林CAS号分子量分子式理化性质飞毒草色素Dc!idin528-53-0338.70cs11O?CfHOMO花青亲分子中专在高度分子共扼体系.含在酸性与说性善团.品溶于水.«».乙好.稀族用洋酸等夜性溶剂中.供外区最大吸收波长在28Onm阳近.可通光区域最大吸或波长江500S50nm范圉内.花青亲美物而的质色困PH值烫化而变化.PH<1呈红色.pH=7-8时呈维色.pH>U时£萱色.矢率阴色京C尸midin5285-5322.70Ci5HiiGa,CrHOHO婕聿牛色今Petunidin142-30-7352.72CeH11a6OHCrh>c-oho天竺英色青PelnryonidinI34.O433067()Ci5HiiCI6“。令夕,CTHO芍为去Petmidin134014)336.72CHCIa.OH力T0gCrH)C-0HO化合的英文名你CAS号分子，分子式结构式理化性质情美色*Malvidin64384-536655CnHiiO6CH>OHmo-05=A110HOCrCM>(=)仪暑和设备花青素的分析方法主要有分光光度法、PH示差法、高效液相色谱法(HP1.C),液相色谱串联质谱法(1.CMSMS)。花青素分子中存在高度分子共扼体系,含有酸性与碱性基团,易溶于水、甲薛、乙醇、稀碱与稀酸等极性溶剂中。分光光度法对区分花青素各个主要成分的含量灵敏度较低，适合于花青素总量的测定；PH示差法虽然方法快捷，但测定结果与高效液相色谱法相比偏低，不适合低浓度的花青素检测：HP1.C是一种常用且可靠的分析技术，通过不同组分在色谙柱中的相互作用和分离来测定花育素的含量；1.e-MS/MS可提供待测物的结构信息，具有较高的灵敏度和选择性。(四)样品制备1、样品制备采用四分法分取样品，取约20Og样品于研磨机中粉