GB_T 43733-2024 植物中绿原酸类物质的测定 高效液相色谱法.docx

ICS07.080CCSA40中华人民共和国国家标准GB/T437332024植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法DeterminationofchlorogenicacidsinplantsHigh-performanceliquidchromatography2024-03T5实施2024-03T5发布国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会前言本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定蚪请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院、深圳市农产品质量安全检验检测中心、上海市计量测试技术研究院、河南顺鑫检测科技有限公司、惠州市食品药品检验所、甘肃省商业科技研究所有限公司、深圳职业技术学院。本文件主要起草人：张协光、杨俊、朱丽、肖伟敏、但琨、董珊、刘冬、邓梦雅、彭祖茂、杨雪、钱濠文、严虞虞、张彦军、黄秀丽、文IJ刚、王杰斌、黎海华、杨森、李兰英、杨国武。植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法1范围本文件规定了植物中6种绿原酸类物质新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C)的测定方法一一高效液相色谱法本文件适用于植物的根、茎、叶、花、果实、种子等样品中的6种绿原酸类物质(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A,异绿原酸B、异绿原酸。的测定。2规范性引用文件下列文作中的内容通过文中的规范性引用面酶成本义件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日增对应的版本适用于本文征一不注日期的引用这件，用取新版本(位据所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试能分法3术语和定义本文件没有需要界定的不语和定义4原理样品经50%甲静水溶液超声提取，Cg反相色谱柱分离，在波长327nm处用高效液相色谱仪紫外检测器检测，相对保留时间定性，外标法定量5试剂或材料如无特别说明，水为GB/T6682规定的一级水。5. 1甲醇(CH3OH):色谱纯。5.2 乙胞(CH3CN):色谱纯。5.3 甲酸(HCoOH):色谱纯。5.4 新绿原酸(CISHlO,CAS号：906-33-2),纯度295%。5. 5绿原酸(Cl8H1O9,CAS号：327-97-9),纯度295%。5.6 隐绿原酸(Cl6H1g9,CAS号：905-99-7),纯度295%。5.7 异绿原酸A(CzsH24O12,CAS号：2450-53-5),纯度N95%。5.8异绿原酸B(C2sH24O12,CAS号：14534-61-3),纯度295%。5.9异绿原酸C(Cz5Hz4O12,CAS号：32451-88-0),纯度295%。5.10 0.1%甲酸水溶液；准确吸取Im1.甲酸3)于I1.容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。5.11 50%甲醇水溶液：准确量取25Om1.甲醇(5.1)和25Om1.水，混匀，作为提取溶剂。5.12 标准储备液(2.50mg/m1.):分别准确称取绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C各0.025g(精确至0.0001g),用甲醇(5.1)溶解并定容至IOnl1.。混匀后转入棕色玻璃容器中，4C冰箱保存，保存期三个月。5.13 标准中间液(100gm1.):分别准确吸取标准储备液(5.12)各1.OOm1.于同一25m1.容量瓶中，用50%甲醇水溶液稀释至刻度，混匀。临用前配制。5.14标准系列工作液：分别准确吸取标准中间液(5.13)0.500m1.、2.5Om1.于100m1.容量瓶中，用50%甲醇水溶液(5.11)定容至100m1.;再分别准确吸取标准中间液(5.13)1.00m1.、2.50m1.、5.00m1.于IOm1.容量瓶中，用50%甲醇水溶液(5.11)定容至10m1.°得到标准系列工作的质量浓度分别为0.500gm1.>2.50ugm1.lO.Oug/m1.、25.0Pgm1.>50.0ugm1.°临用前配制。5. 15微孔滤膜(NY)O45m.6仪器设备5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。6. 2电子天平：感量0.Ig和0.1mgo6.1 涡旋振荡器。6.2 超声波振荡器。6. 5离心机：转速不低于4000r/mino7样品6.1 祥品的制备6.1.1 含水量较低的固体样品：称取100g样品，粉碎均匀，制得均匀一致的样品，冰箱中冷藏保存。6.1.2 新鲜水果和蔬菜类；称取50Og样品，粉碎均质，制得均匀一致的匀浆，冰箱中冷冻保存。6.2 样品的提取准确称取2g(精确到0.00(Hg)样品于50.0m1.离心管中，加人30m1.50%甲醇水溶液(5.11),超声提取30min,用50%甲醇水溶液(5.11)定容至刻度，混匀，离心。经0.45Um微孔滤膜过滤后待测。8试验步骤8.1色谱参考条件8.1.1色谱柱：C8柱，5m,4.6mm×250mm(或相当型号色谱柱)。8.1.2 流动相：:乙庸，B:0.1%甲酸-水溶液，淋洗梯度见表1。8.1.3 流速：1.0mlmino8.1.4 柱温:308.1.5 1.5检测波长：327nmoK1.6进样量：101.o表1高效液相色谱洗脱梯度参考条件时间min流速ml./min流动相A%流动相B%0.01.010905.01.0109018.01.0406018.51.0802020.01.0802021.01.010908.2 标准曲线绘制将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准品液相色谱图参见附录A的图A。8.3 样品测定将样品溶液(见7.2)注入高效液相色谱仪中，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到待测液中绿原酸类各物质的浓度。样品液相色谱图可参考图A.2金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图。注：必要时，对待测®进行稀释。9分析结果的表述样品中6种绿原酸类物质的含量按式(1)计算：vci×V×f,n,三m.式中：X,样品中各组分的含量，单位为毫克每千克(mgkg);c;由标准曲线得到样品溶液中各组分的含量，单位为微克每亳升(ugm1.)V样品溶液定容体积，单位为亳升(m1.);f试液的稀释倍数；m;样品质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10机11其他方法的检出限为1.5mgkg,定量限为5mg/kgoGB437332024附录A（资料性附录）6种绿原酸类物质标准品及金银花样品的液相色谱图A.16种绿原酸类物质标准品的液相色谱图见图A.1.绿岸酸Rd绿原酸新绿原酸异绿原酸A异绿原酸国9异景原ISC图A.16种绿原酸类物质标准品的液相色谱图A.2金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图见图A.2。母原酸40Ci异绿原酸AZgto新绿原酸OEO.94图A.2金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图中华人民共和国国家标准植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法GB/T437332024中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100O29)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室：(Olo)68533533发行中心：(010)51780238读者服务部：(HO)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880X12301/16印张0.75字数12千字2024年3月第一版2024年3月第一次印刷书号：1550661-65587定价29.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(010)68510107